第11章 高效液相色谱分析.pptVIP

第11章 高效液相色谱法;液相色谱仪（2）; 8 - 1概述;一、HPLC与GC差别;2．流动相差别的区别 GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起 正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改 变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。 3．制备样品差别 ; 高效液相色谱法特点： 高压：150-350*105 Pa 高效：大于30000塔板/米 高速：10－30mins 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测）;高效液相色谱;北京瑞利;高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统;贮液器; ; 常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。;核心：柱塞往复泵;梯度淋洗;;;梯度淋洗装置;;通常使用耐高压的六通阀进样装置: ;准备状态;3 分离系统——色谱柱 ;使用色谱柱注意事项： 1 溶剂要脱气，溶剂和样品应过滤， 防止堵塞。 2 更换流动相要渐变。 3 用后要保护好。;4．检测系统 ;HPLC中应用最广泛的检测器。它的原理基于待测组分对特定波长的紫外或可见光的选择性吸收，试样浓度与吸光度的关系服从朗伯-比尔定律。;高效液相色谱检测器：; ;8-3高效液相色谱的固定相和流动相 ;1.表面多孔型固定相;2．全多孔型固定相 ;二、流动相; 所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。;（3）高纯度 由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50～100nm。 （ 4 ）化学稳定性好 不能选与样品和固定相发生反应或聚合的溶剂。 （ 5 ）低粘度 若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。;流动相及流动相的极性;流动相组成;1. 吸附色谱（液-固吸附色谱）：以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 2. 分配色谱（液-液分配色谱）：早期通过在载体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在载体表面。;3. 离子交换色谱：固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）：以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶；;一、液一液分配色谱法（LLPC） 在液-液色谱中，流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。 1．分离原理 液液分配色谱的分离原理根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。; ;3．流动相 在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶??而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。 如果采用流动相的极性小于固定相的极性，称为正相分配色谱，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。 如果采用流动相的极性大于固定相的极性，称为反相分配色谱。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。 ;二、化学键合相色谱法（CBPC） ;三、液一固吸附色谱法(LSAC);2．固定相 ;3、流动相 ;四、离子交换色谱法（IEC） ;五、凝胶色谱法（SEC）;