第十三章 厌氧菌的常.pptVIP

第十三章 厌氧菌的常规检验 学习要求： 1、了解厌氧菌常见的种类； 2、掌握常用的厌氧培养法； 3、熟悉厌氧菌感染的临床指征及采集运送标本的原则； 4、掌握破伤风梭菌的芽胞特点及产气荚膜梭菌的菌落特征和汹涌发酵现象。 厌氧菌 概念: 是一大群在有氧环境中不生长，必须在无氧环境条件下才能生长繁殖的细菌 特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位 厌氧菌特点 一、种类 依据：革兰染色性、形态、鞭毛、芽胞、荚膜和代谢产物等 二、微生物学常规检验 临床分离培养厌氧菌的原则： 正确选择标本、收集标本、运送标本和提供可靠的厌氧条件 厌氧菌培养的原则： 通过物理、化学及生物学方法驱除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势 （一）常用的厌氧培养法 庖肉培养法 焦性没食子酸法 厌氧罐培养法 厌氧气袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法 用马肉或牛肉渣加适量肉汤制备而成，适用于所有厌氧菌特别是梭状芽胞杆菌的培养。培养基中的肉渣含有谷胱甘肽和不饱和脂肪酸，能吸收培养基中的氧气，使氧化还原电势下降，加之培养基的表面用凡士林封闭，利于厌氧菌生长。 焦性没食子酸法 在一洁净的玻璃板上放置一块消毒纱布，在纱布上加1g焦性没食子酸和20%NaOH0.5ml，立即盖上已接种标本的平板培养基，平板四周用石蜡密封，阻止氧气进入，待上述药品起化学反应后，可吸收氧气，造成厌氧环境。然后置35℃培养18～24小时。 此法简便，一般实验室均可应用，但该化学反应中产生的焦性没食子碱，对细菌有一定的毒性作用，因此分离率较低。 厌氧罐培养法 利用能密封的罐子，利用物理或化学方法造成无氧环境。 常用抽气换气法和冷触媒法。 抽气法抽出罐内空气，充入氮气，如此反复三次，最后充入10%H2、10%CO2、80%N2的混合气体，并用钯为触媒，催化O2与H2化合成水，达到厌氧环境 罐内置美蓝指示液，有氧时美蓝显蓝色，无氧时被还原为无色。 冷触媒法则是在罐内放置产气袋，袋内装有硼氢化钾、碳酸氢钠和枸盐酸制成的药片，使用时剪开一上角加入10ml水，立即盖好罐盖，拧紧固定卡，此时由气袋内产生的氢气，在预先放入罐内的钯粒催化下与罐内的氧气结合成水，于10～30S即见罐盖和罐壁上出现水滴，罐内厌氧状态有液体美蓝指示剂指示 此法效果较好适用于工作量较大的实验室。 厌氧气袋法 将接种好的平板培养基，置入特制的塑料袋内，并密封袋口，其原理同厌氧罐的冷触媒法，美蓝指示剂在小玻璃管内用时应折断，无色说明厌氧状态良好。 此法简便易行，携带方便，尤其适合床边接种和基层医院使用 厌氧手套箱法 此为一自动控制的厌氧箱，分金属型和塑料型两种。 操作者通过一个密闭的手套将手伸进箱中，手臂可在箱内自由活动，箱内放有冷催化剂，输入三种混合气体（H2、CO2、N2），使箱内的O2 和H2形成水，以保持箱内无氧状态。 箱内的温度可自动控制。培养基应在使用前48小时置入箱内。 制作平板、接种标本、培养、观察培养物和鉴定菌种均在箱内进行。 本箱适用于专性厌氧菌的培养，是目前最先进的厌氧培养设备，但价格昂贵培养成本高。 （二）标本的采集与送检 1、标本采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检 2、标本的运送 注射器运送法 无氧小瓶运送法 大量液体标本运送法 组织块运送法 棉拭运送法 厌氧袋运送法 （三）检验程序 （四）检验方法 1、肉眼观察： 观察标本的性状（脓性、带血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 2、涂片染色镜检： 估计细菌数量、观察细菌形态、染色性，以便选择培养基和培养方法 厌氧菌感染的临床及细菌学特征 感染发生于黏膜附近 深部外伤 感染局部有气体产生 分泌物有恶臭或暗血红色 某些抗生素治疗无效的感染 标本直接涂片细菌染色不均 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养 3、分离培养 （1）初代培养 非选择性培养基 心脑浸液＋5％脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养拟杆菌和普雷沃菌 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌 （2）次代培养和厌氧菌的确定： 挑5个以上不同菌落做耐氧试验，每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定 第二节 梭菌属 梭菌属即梭状芽胞杆菌属 严格厌氧，革兰阳性杆菌，有芽胞 多数为腐生菌，少数为病原菌，产生外毒素和侵袭性酶致病 临床有致病性的主要有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌及艰难梭菌 一、破伤风芽孢梭菌 破伤风梭菌是梭菌属中常见的一种芽胞杆菌 存在于自然界中，可通过伤口进