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植物保护研究技术——植病部分 1. 菌物培养基： 基本营养：水分、碳源、氮源、矿质元素、生长因子 培养基类型：合成培养基、半合成培养基、天然培养基 培养基PH：5.0—6.8 选择性培养基 = 普通培养基+抗菌素+杀菌剂+其它 2. 植物病理学常用培养基类型及灭菌方法。 PDA 培养基（potato dextrose argar， PDA ） Potatoes ：200.0g ； Glucose：20.0 g ；Agar ：18.0-20.0 g ； Water ：1000 ml； Boil 200 g scrubbed and sliced potatoes in 1000 ml water for 1 hour. Pass through fine sieve. V-8 琼脂培养基（V-8 juice agar ） *V-8 Juice：200.0ml； CaCO ：33.0g ； Agar ：15.0-20.0 g ； Fill up with distilled water to 1000.0 ml. Adjust pH to 7.2.* May be replaced by tomato mash if not available. 燕麦片琼脂培养基 燕麦片30G ；琼脂 15-20G； 水 1000ml； 燕麦片加水 10000 ml，在沸水浴上加热 1 小时，纱布过滤后加水补足 10000 ml， 加琼脂熔化后灭菌。 玉米粉琼脂培养基 玉米粉 300 g ； 琼脂 15-2G ； 水 1000 ml 配置方法同（3 ）； 3. 植物病原真菌的纯化方法、类型及各方法的特点。 保证所用菌种是从单个细胞或单个孢子繁殖而来的纯种 稀释法： A ．水洋菜平板稀释法一 将纯净的水洋菜培养基，倒入培养皿中凝固，然后在灭菌的载玻片上放入一滴水，加入孢子，配成浓 度适当的悬浮液，用三角涂抹玻棒，蘸上孢子悬浮液，涂抹于水洋菜培养基表面，然后用低倍显微镜擦培 养皿的反面检查孢子，用蜡笔做一个记号，再用灭菌后的刀子或接菌针将这一块培养基切下，移置在适宜 的培养基上生长。 操作过程在接菌台上，保持无菌状态。植物病理学常用培养基类型及灭菌方法。 B．水洋菜平板稀释法二 将菌种上产生的分生孢子用灭菌水洗下，稀释到每滴在低倍显微镜下每视野大约有25 个孢子左右。取 灭过菌的试管，一支含有一毫升无菌水，另一支含有9 毫升WA 培养基（大约45 ℃）。给无菌水的试管加一 滴孢子悬浮液(在低倍镜下，每滴孢子悬浮液在视野含有大约25 个孢子) ，然后把孢子悬浮液到入含有WA 培养基的试管中，振荡后倒入灭过菌的培养皿中，等凝固后，用低倍显微镜擦培养皿的反面检查孢子，用 蜡笔做一个记号，再用灭菌后的刀子或接菌针将这一块培养基切下，移置在适宜的培养基上生长。 干针挑取法： 即用细缝衣针在低倍镜下直接挑取单个孢子。此方法最适用于分离开的真菌孢子，如黑粉菌的厚坦孢 子、锈菌的夏孢子及一些担子菌的担子孢子。先将孩子放在灭菌的载玻片上，用食指和大拇指握住缝衣针， 在低倍镜下检视，当针尖接触孢子时，孢子即离开载玻片而附着于针尖上，然后移殖培养。 适合于分生孢子较大，颜色较深的孢子分离。 菌丝尖端分离法： 不产生孢子的或产生孢子而孢子不容易分离的真菌，可以用切取菌丝尖端的方法纯化，即将真菌培养 在培养基表面，用低倍镜找到单独的菌丝尖端后，用玻璃毛细管，从菌丝尖端徐徐插入，连同培养基将菌 丝尖端切下，然后将这一带有菌丝的培养基吹在培养基平面或斜面上培养即成。为了便于找到单独分开的 菌丝尖端，最好在培养后不久的培养基表面分离。 适合于不产生分生孢子的菌丝体的分离。 1 / 3 植物保护研究技术——植病部分 4. 简要说明真菌保存的原理，例举说明常用的保藏方法。 保持原菌种特性，防止或延缓退化；保持活力而不死；保证纯培养，防止污染。 保存的基本原理是使微生物的生命活动处于半永久的休眠状态，也就是使微生物的新陈代谢作用限制 在最低的范围内。干燥、低温、缺氧、避光和缺少营养是主要措施。 菌种保藏方法： 1) 室温保存：斜面培养是最常用的方法；16- 17℃；PCA 培养基。 2) 冰箱保存：4-8℃的冰箱中可以