第八讲 细胞培养.pptVIP

第6章 细胞培养 本章教学目的与要求 1、掌握获得单细胞无性系的操作技术 2、掌握细胞培养的方法，其含义及特点 3、了解影响单细胞培养的因子 4、掌握细胞悬浮培养的方法：成批培养；连续培养。 5、理解细胞悬浮培养的应用 一、单细胞的分离 机械法： 材料：薄壁组织排列松散、细胞间连接不紧密、接触点少的材料才能采用此法，如叶肉组织。 方法：用研钵（匀浆管）研碎，过滤，低速离心。 优点：细胞不受酶的伤害。 缺点：材料受限，效率低下，适用于生理生化理论研究，不能用于大规模生产。 酶解法： 是通过叶肉组织获得大量单细胞的好方法，常用果胶酶。 方法：灭菌—去下表皮-- 剪成小块– 加入酶液中（其中含有渗透保护剂）--真空泵抽气---置摇床上震荡，期间换数次酶液，获取细胞---用培养基洗涤单细胞，培养。 不足：禾本科植物用此法难以获得单细胞。 单细胞培养常用的方法： （一）、看护培养法（Nurse culture） 用途：诱导形成单细胞无性系。 另一种看护培养法： 2. 看护培养基本技术 （1）在一个培养瓶中加入一定厚度的固体培养基，灭菌后备用。 （2）在无菌条件下，将一小块（1cm3）活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片（1cm2）已灭菌的滤纸，放置一晚上。 （3）将分离的单细胞接种到培养基的滤纸上。 （4）恒温培养。 优点：（1）简便易行。（2）效果好，易于成功。缺点：（1）不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。 含义及用途： 用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。 （三）、平板培养法（Plante Culture） 1 含义及用途： 分散细胞的方法 选用松散易碎的最初培养材料（愈伤组织） 手工压碎 培养基中加入2，4-D，果胶酶，纤维素酶等。 1、成批培养特点 2、成批培养的方法 (1)旋转培养 (2)往返震荡培养 (3)旋转震荡培养 (4)搅动培养 1、连续培养的特点： (1)半连续培养：每隔一定时间倒出一定量的悬浮液，同时补充加入等量的新鲜培养液，并把细胞收集后转入新培养基。 (2)连续培养：加入和流出的培养基速度相同，通过调节速度，可以使细胞生长速度维持在接近最高速度水平。可以通过调节某限制因子浓度或细胞浓度来实现。 三、细胞悬浮培养主要应用 1、植物有用物质的生产 2、诱发和筛选突变体 3、原生质体培养和细胞分离 4、食品生产。 本章小结： 1、单细胞的分离方法:1)愈伤组织诱导;2)单细胞悬浮液的制备 2、单细胞培养的方法:（1）、看护培养法;(2)微室培养法;(3)平板培养法 3、平板培养的基本技术 （1）单细胞悬浮液的制备 (2)悬浮细胞密度的调制 （3）琼脂培养基配制:0.7 % 琼脂条件培养基。 （4）平板制作 （5) 培养 本章小结： 4、影响单细胞培养的因子:1)条件培养基;2)初始细胞植板密度(临界密度);3)生长物质;4)pH;5)CO2 5、细胞悬浮培养方法：成批培养；连续培养。 6、成批培养的方法。 7、连续培养的种类：(1)半连续培养；(2)连续培养。 8、连续培养的方法:（1）浊度恒定法;（2）化学恒定法 9、细胞悬浮培养的应用：（1）植物有用物质的生产；（2）诱发和筛选突变体；（3）用于原生质体培养和细胞器分离；（4）食品生产 （二）、连续培养（Continuous culture） 含义：指在培养过程中，以不断抽取悬浮培养物并注入等量新鲜培养基，使培养物不断得到养分补充，保持其恒定体积的培养。 第二节 细胞悬浮培养 （1）新鲜培养基的不断加入,保证了养分的充分供应；（2）可使细胞保持在增殖旺盛的对数生长期中；（3）适于大规模工业化生产及研究各营养物的影响，确定限制因子。 第二节 细胞悬浮培养 第二节 细胞悬浮培养 2、连续培养的种类： 加入培养基 排出培养基及其培养物 第二节 细胞悬浮培养 连续培养图示： 第二节 细胞悬浮培养 第6章 细胞培养 第6章 细胞培养 * * 大 家 好 ！ 植物组织培养 本章主要内容 第6章 细胞培养 单细胞培养 细胞悬浮培养 第6章 细胞培养 概念及应用： 细胞培养 单细胞培养是指将植物单细胞或细胞团直接在培养基中进行培养一种培养方式。操作简单，重复性好，群体大。 用途：广泛用于细胞学基础研究、突变体筛选、遗传转化、有用化合物的筛选等诸多方面。 第一节 单细胞培养 分离的单细胞 看护培养 微室培养 平板培养 单细胞无性系 细胞培养 机械法：碾碎，过滤，离心。 酶解法：用纤维素酶和果胶酸酶从组织分离 愈伤组织分离单细胞 二、单细胞培养方法（Single cell culture） 第一节 单细胞培养 第一节 单细胞培养 单细胞