天然产物抗菌、抗病毒活性的原理与评价方法.pptVIP

第四次课 天然产物抗菌活性的原理与评价方法 天然产物抗病毒活性的原理与评价方法 天然产物的抗菌活性与评价 常用术语 抗菌谱(antibacterial spectrum)：药物抑制或杀灭病原微生物的范围称抗菌谱。 抗菌活性：指药物抑制或杀灭病原微生物的能力。能够抑制培养基内细菌生长的最低浓度称最低抑菌浓度（MIC）；能够杀灭培养基内细菌的最低浓度称最低杀菌浓度（MBC） 。 抑菌剂/杀菌剂： 抗生素后效应（postantibiotic effect,PAE） 抗菌药物的开发 抗菌药物的作用机制 抑制细菌细胞壁的合成 如β-内酰胺类万古霉素等。 影响细胞膜通透性 如多粘菌素、两性霉素B等。 抑制蛋白质合成 如氨基甙类、四环素类、红霉素、氯霉素等。 抑制核酸代谢 如利福平、喹诺酮类。 影响叶酸代谢 如磺胺类、甲氧苄啶等。 抗菌药物的作用机制 细菌的耐药性 耐药性又称抗药性，系细菌与药物多次接触后，对药物敏感性下降甚至消失。细菌产生耐药性的途径有： 产生灭活酶 改变药物靶位结构 降低胞浆膜通透性 改变代谢途径 。 天然产物的抗菌活性 具有抗菌活性的天然产物组分 萜类(异戊二烯聚合物): 影响细菌的呼吸作用及细胞膜功能, 从而起到抑菌的作用。 黄酮化合物特别是异黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌及枯草杆菌具有很强的抗菌作用。广谱抗菌活性。 生物碱对大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、枯草杆菌和白色葡萄球菌的生长均有明显的抑制作用。 苷类、皂甙、醌类、香豆素、木脂素、芪类、酯类、酚类、醛类、醇类、甾类、有机酸及精油类等化合物。 天然产物抗菌活性的评价方法 体外抗菌活性评价 药物活性评价的第一步 说明药物对细菌的直接抑制或杀菌作用 仅用于测定药物对细菌固有的敏感性，以最小抑菌或最小杀菌浓度为指标。受制剂纯度的影响较大。 天然产物体外抗菌活性的实验设计 实验菌株的选择 金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、化脓性链球菌、粪链球菌（好氧、革兰氏阳性菌） 大肠杆菌、肺炎杆菌、普通变形杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、淋球菌（好氧、革兰氏阴性菌） 脆弱类杆菌、坏死梭形杆菌、溶组织梭状芽孢杆菌（厌氧菌） 天然产物体外抗菌活性的实验设计 待测样品的制备要求 注意无机离子浓度、pH、干扰物质、鞣质和蛋白质对结果的影响。 体外抗菌实验方法 纸片扩散法、琼脂稀释法、肉汤稀释法等。 观察指标 细菌生长（菌落生长）、细菌含量（浊度）、活菌（活组织光密度）。 天然产物体外抗菌活性的实验设计 纸片扩散法 抑菌圈直径的大小可以用来表征抑菌药液效果的显著与否。一般是将供试菌先接种在培养基表面，再挖小孔或放置钢圈，并在孔内加抑菌液，药液便向周围培养基扩散。培养后，有抗菌作用的药液就会在小孔周围形成清楚的抑菌圈。 菌种转接：琼脂平板—肉汤液体培养基—肉汤琼脂培养基画线接种。 待测样品给药：用滤纸片沾定量的药液，放置在肉汤琼脂培养基表面，轻压纸片与培养基适当接触。 孵育与检测：37 ?C ,18-24hr。测量抑菌圈的直径。 天然产物体外抗菌活性的实验设计 肉汤稀释法 待测样品的配制：待测药品用肉汤培养基作对倍系列稀释。 接种与孵育： 菌液与含药肉汤培养基混匀，37 ?C ,18-24hr。 检测：1）以浊度为检查试管中有无细菌生长，以不显示浊度、细菌未生长的那一管的药液稀释度作为最小抑菌浓度MIC (minimal inhibitory concentration)。2）将无肉眼可见生长的试管中肉汤画线接种于琼脂平板， 37 ?C 18hr孵育后以平板上菌落生长数10个的药物浓度作为最低杀菌浓度MBC (minimal bactericidal concentration)。 天然产物体外抗菌活性的实验设计 对厌氧菌抗菌作用的体外评价 类似肉汤稀释法，用特殊营养培养，接种菌量宜大，厌氧培养。 体外抗菌活性的其它方法 平皿打洞法、挖沟灌药法、杯管法、滤纸条法等。 天然产物体外抗菌活性评价（例） 陆志科, 谢碧霞.不同种竹叶的化学成分及其提取物抗菌活性的研究.西北林学院学报　2005, 20 (1) : 49～52 菌液制备：菌种活化后挑取菌苔,用无菌水分别制成含菌数约106 Fμ/mL 的菌悬液。 给药：滤纸片法。用打孔器将滤纸打成若干直径为6 mm的圆形滤纸片,经干热灭菌后,浸在竹叶提取物水溶液中。分别将0. 1 mL供试菌悬液或孢子悬液加入到琼脂平板，然后用无菌涂布器涂布均匀。再用无菌摄子夹取浸有竹叶提取物的滤纸片贴在上述各种含菌平皿上,滤纸片在每个平皿内间隔一定的距离贴3片,并用浸有无菌水的滤纸片做对照。然后将各皿放入各种菌适宜的温度培养。取出后,测量其抑菌