新技术没有P的qPCR.pdf

没有P 的qPCR qPCR 中的P 代表什么？Polymerase，聚合酶。如果qPCR 少了聚合酶，你一定觉得这是在开玩 笑，巧妇难为无米之炊，没有聚合酶，定量PCR 还怎么做。 一直以来，研究人员在尝试创造自我复制的 但是当缺乏适当的配体时，整个分子就变得不稳 酶。实现这个目标的方法之一是用RNA 酶来催化 定，连接酶活性也丧失。RNA 的指数增长率取决 RNA 分子的复制，包括RNA 酶本身。这已经通过 于配体的浓度，这就能确定样品中配体的浓度。这 交叉催化（cross-catalytic ）系统来实现了，它包 个过程与定量PCR 是相似的，但是适用性更广。 括两个RNA 酶，它们能利用四种底物成分来催化 多种目标都受用，包括与诊断和环境监测相关的蛋 彼此的合成。 白和小分子。 “R3C”就是一种能自我复制的RNA 酶，但不 随着适体开发成为一种常规的方法，该系统能 是从核苷酸到核苷酸，而是通过碱基配对将两个 用于检测从蛋白到代谢物的所有分子。同时，研究 RNA 核苷酸连在一起。但是，这个过程效率很低， 人员也在对适酶系统进行改进，Joyce 认为一年内 因为底物形成了无生产力的复合物，限制了指数级 倍增时间将缩短至10 分钟。根据这种分子的动力 的增长，而倍增时间长达17 小时。美国斯克里普 学特性，他认为1 分钟也是完全可行的。（生物通 斯研究所（Scripps Research Institute ）的Gerald 薄荷） Joyce 和他的同事就一直在研究并改进“R3C”连接 原文检索： 酶。 Lam, B.J. Joyce, G.F. Autocatalytic 他们将R3C 转变成交叉催化的形式，在那里 aptazymes enable ligand-dependent exponential 正链酶将两个RNA 分子组合起来，产生非常相似 amplification of RNA. Nat. Biotechnol. 27, 的负链酶，这个负链酶反过来又连接两个底物，形 288–292 (2009). 成正链酶。随后，Joyce 他们利用体外演化（in vitro evolution ）来改善这种RNA 酶的催化性质。在他 Lincoln, T.A. Joyce, G.F. Self-sustained 们的努力下，当加入新鲜的寡核苷酸和镁离子之 replication of an RNA enzyme. Science 323, 后，这些酶能够在42°C 的恒温下以指数方式自我 1229–1232 (2009). 扩增，倍增时间缩短至1 小时。 生物通编者注： Joyce 认为：“这种复制品的最大应用是它是 什么是适体？适体是与特异靶分子结合的寡 分子事件的信号放大器。”他指的是将催化结构域 核苷酸或肽段分子。它们通常从大的随机序列库中 和配体结合结构域（适体，aptamer ）结合起来， 挑选而出，天然的适体也存在于核糖开关中。适体 产生“适酶（apatazyme ）”，这样扩增就成为配体 可用作基础研究，或作为高分子药物应用于临床。 依赖型。在配体存在时，适体序列是有序的，“适 适体可分为核酸适体（DNA 或RNA 适体）及蛋白 酶”的催化结构域也是，从而实现了指数级的扩增。 适体。 2009年8月6日第六十五期 第