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实 验 八 胆 红 素 测 定 ( 改 良 J – G 法) 实 验 目 的 掌握总胆红素和直接胆红素 (改良J-G法)的测定原理，参考值范围，注意事项。 胆红素测定作用 反 映 肝 脏 的 分 泌 与 排 泄 功 能。 胆红素的来源 Hb分解释放的血红素为胆红素的直接来源。 （1）约70%~80%是由衰老的RBC破坏、释放出的Hb分解。 （2）约10%~20%来自于组织中非Hb的血红素，如肝中释放的的血红素等。 （3）极少部分是由于骨髓造血过程中，生成的Hb或血红素，以及少量未成熟RBC的分解（无效造血）产生的血红素。 胆红素的分类 （1）未结合胆红素(Bu)：未与葡萄糖醛酸基结合，具亲脂性，须加入加速剂破坏分子内部的氢键后才能与重氮试剂反应，又称间接胆红素。占总胆红素的4/5。 胆红素的分类 （2）结合胆红素(Bc) ：与葡萄糖醛酸基结合，具亲水性，与重氮试剂直接反应，又称直接胆红素。占总胆红素的1/5。 黄疸分类 根据总胆红素的浓度 隐性黄疸:总胆红素17.1~34.2μmol/L。 显性黄疸:总胆红素大于34.2μmol/L。 注：TB 17.1μmol/L(2mg/dL) 黄疸分类 根据造成黄疸的原因 (1)溶血性黄疸 (2)肝细胞性黄疸 (3)阻塞性黄疸 三 种 黄 疸 的 比 较 溶血性黄疸 肝细胞性黄疸 阻塞性黄疸 病因 RBC大量破坏 肝脏实质性病变 胆道阻塞 Bu ↑↑ ↑ ↑ ↑ ↑ Bc ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ 测 定 方 法 重氮盐法 胆红素氧化酶（BOD)法 高效液相色谱法（HPLC) 导数分光光度法 直接分光光度法 钒酸盐法 DBil测定原理(改良J-G法) 血清中的DBi在强酸环境中，与重氮对氨基苯磺酸反应,生成有色偶氮胆红素, 通过测定550nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中DBi的浓度。 TB测定原理(改良J-G法) 血清中的结合胆红素在强酸环境中与重氮对氨基苯磺酸反应,生成有色偶氮胆红素,非 结合胆红素在表面活性剂的作用下,也能进行这样的反应,通过550nm比色,计算其含量。 试剂 试剂组成 直接胆红素 总胆红素 试剂A 盐酸 盐酸 对-氨基苯磺酸 对-氨基苯磺酸 表面活性剂 试剂B 亚硝酸钠 亚硝酸钠 强 调 两项目分开测定，利于时间控制。 DBi 操 作 空白管 标准管 样本管 工作试剂 (ml） 2.5 2.5 2.5 37 ℃孵育5分钟 蒸馏水(ml） 0.05 -- -- 标准液(ml） -- 0.05 -- 样本(ml) -- -- 0.05 混匀， 37 ℃孵育5分钟，550nm,空白管调0，读取标准管和样本管的吸光度。 TB 操 作 空白管 标准管 样本管 工作试剂 (ml） 2.5 2.5 2.5 3 7 ℃孵育5分钟 蒸馏水(ml） 0.05 -- -- 标准液(ml） -- 0.05 -- 样本(ml) -- -- 0.05 混匀， 37 ℃孵育10分钟，550nm,空白管调0，读取