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实验结果 结果计算方法： Ig浓度（g/L）= 样本管吸光度 校准管吸光度 IgA：1.72 g/L IgG：9.77 g/L × Ig校准浓度（g/L） IgM：1.37g/L 沉淀反应 沉淀反应：简介 可溶性抗原如细菌浸出液、血清、毒素等与其相应的抗体结合，当两者比例合适、并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。 沉淀反应中的抗原叫沉淀原,抗体称为沉淀素。 沉淀反应：简介 沉淀反应的发生机制与凝集反应基本相同。不同之点是：沉淀原分子小，单位体积内总面积大，故在定量试验时，通常稀释抗原。 沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。 琼脂扩散试验 利用可溶性抗原与相应抗体在半固体的琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就形成可见的沉淀线。这种反应称琼脂扩散试验。 琼脂扩散试验可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。扩散与电泳结合后又有对流免疫电泳、火箭电泳及交叉免疫电泳等 琼脂扩散试验 其原理是：物质自由运动形成扩散现象，扩散可以在各种介质中进行。我们所使用的1％～2%的琼脂凝胶，琼脂形成网状构架，空隙中是98％～99%的水，扩散就在此水中进行。允许分子量在20万以下甚至更大些的大分子物质通过，绝大多数可溶性抗原和抗体的分子量在20万以下，因此可以在琼脂凝胶中自由扩散，所受阻力甚小。二者在琼脂凝胶中相遇，在最适比例处发生沉淀，此沉淀物因颗粒较大而不扩散，故形成沉淀带。 单向琼脂扩散试验 原理：将一定量的抗体与琼脂混合，倾注于玻璃板上，凝固后，在琼脂层中打孔，再将抗原加入孔中。孔中抗原相四周扩散，在抗原与抗体比例合适处，呈现白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原浓度呈正比。 双向扩散试验 双向扩散试验是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色的沉淀线。 【实验材料】 抗体：抗AFP 抗原: AFP 待测血清。 · 1％琼脂 玻片、吸管、微量加样器、打孔器、水浴箱、湿盒、温箱。 【实验方法】 1．将琼脂加热熔化，冷却至50－60度，用吸管吸取4ml缓缓加在玻片上（滴加时要小心，要使琼脂盖满玻片，勿溢出并避免产生气泡） 2. 待琼脂凝固后，按图9用打孔器打孔。 3. 用微量加样器加样，中心孔加抗体，其余孔分别加正常人血清、待检血清等。 4．将加样的琼脂凝胶板平放于湿盒内，置37℃，24h后观察结果。 【实验结果】 观察两孔之间是否出现沉淀线，并记录实验结果。 对流免疫电泳 当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ，抗体的 PI 比较高，在适当的 pH 值下，抗体带正电荷而抗原带负电荷，故在电场中抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动，直至相遇后形成沉淀线，其原理与双向免疫扩散相同，但具有方法简便，快速及一次电泳可以检测多个样品等特点。 【实验材料】 1．电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥-盐酸缓冲液。 2．抗体：抗AFP。 3．抗原：AFP阳性血清、待检病人血清。 4．1％琼脂 用pH 8.6巴比妥-盐酸缓冲液配制，冰箱保存备用。 5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、10 ml吸管、移液器、移液头。 【实验方法】 1．制板 2．打孔 3．加样 将抗原加入琼脂板上有标记孔侧的小孔中，抗体加入另一侧小孔中，以加满为度，不可溢出孔外。(如图示) 4．电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压6－10 V/cm板长，电泳约30－60 min。 5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。 【实验结果】 将玻片对着强光源，先观察AFP阳性血清孔与抗体孔之间的白色沉淀线，然后再观察待检血清孔与抗体孔之间是否也有沉淀线出现，如有沉淀线，则表示AFP试验阳性，否则AFP试验为阴性。 溶血反应 溶血反应是补体参与的抗体致敏红细胞的溶解反应。参与反应的成分有3种：①红细胞，一般用绵羊红细胞（SRBC）；②抗红细胞抗体，也称溶血素，多为家兔抗SRBC的抗血清；③补体。 溶血反应的直接用途是测定总补体活性或溶血素的效价；也可利用溶血系统作为指示剂，检测另一反应系统的抗原或抗体，即补体结合试验。 【实验方法】 取小试管，按下表加入试剂 试剂 1 2 3 2％红细胞 0.5ml 0.5ml 0.5ml 溶血素 0.5ml 0.5ml － 补体 0.5ml － 0.5ml 生理盐水 0.5ml 1.0ml 1.0ml 免疫电泳 免疫电泳是一种将区带电泳和双向免疫扩散相结合的免疫化学分析技术。 实验原理 先将抗原样品在琼脂平板上进