上海中医药大学分子生物学常用技术在中医药研究中的应用课件 课程总结和部分技术介绍.pptVIP

小鼠外显子芯片，有关POMC基因，有4组探针，第4组基本不表达（作图取前3组探针）。其中，探针2落在ACTH内。4组探针杂交结果如下： AAACGGGAGGCGACGGAAGAGAAAAGAGGTTAAGAGCAGTGACTAAGAGAGGCCACTGAACATCTTTGTCCCCAGAGAGCTGCCTTTCCGCGACAGGGGTCCCTCCAATCTTGTTTGCCTCTGCAGAGACTAGGCCTGACACGTGGAAGATGCCGAGATTCTGCTACAGTCGCTCAGGGGCCCTGTTGCTGGCCCTCCTGCTTCAGACCTCCATAGATGTGTGGAGCTGGTGCCTGGAGAGCAGCCAGTGCCAGGACCTCACCACGGAGAGCAACCTGCTGGCTTGCATCCGGGCTTGCAAACTCGACCTCTCGCTGGAGACGCCCGTGTTTCCTGGCAACGGAGATGAACAGCCCCTGACTGAAAACCCCCGGAAGTACGTCATGGGTCACTTCCGCTGGGACCGCTTCGGCCCCAGGAACAGCAGCAGTGCTGGCAGCGCGGCGCAGAGGCGTGCGGAGGAAGAGGCGGTGTGGGGAGATGGCAGTCCAGAGCCGAGTCCACGCGAGGGCAAGCGCTCCTACTCCATGGAGCACTTCCGCTGGGGCAAGCCGGTGGGCAAGAAACGGCGCCCGGTGAAGGTGTACCCCAACGTTGCTGAGAACGAGTCGGCGGAGGCCTTTCCCCTAGAGTTCAAGAGGGAGCTGGAAGGCGAGCGGCCATTAGGCTTGGAGCAGGTCCTGGAGTCCGACGCGGAGAAGGACGACGGGCCCTACCGGGTGGAGCACTTCCGCTGGAGCAACCCGCCCAAGGACAAGCGTTACGGTGGCTTCATGACCTCCGAGAAGAGCCAGACGCCCCTGGTGACGCTCTTCAAGAACGCCATCATCAAGAACGCGCACAAGAAGGGCCAGTGAGGGTGCAGGGGTCTTCTCATTCCAAGGCCCCCTCCCTGCATGGGCGAGCTGATGACCTCTAGCCTCTTAGAGTTACCTGTGTTAGGAAATAAAACCTTTCAGATTTCACAGTCGGCTCTGATCTTCAATAAAAACTGCGTAAATAAAGTC * Affy的3组探针（每组4个探针）：探针组1、探针组2、探针组3、探针组4，ACTH 编码区、内啡肽 编码区。第2外显子。 POMC基因表达的改变： 各组小鼠下丘脑POMC表达 不同证候小鼠下丘脑该基因 不同证候小鼠垂体该基因 正常小鼠POMC下丘脑/垂体比 以上结果表明，当外显子2被剪接掉，该基因的编码起始位置落在ACTH的编码区内，这样ACTH便得不到编码。也就是说，该基因的表达产物没有了ACTH。请注意，下丘脑生理状态下如此，但是邪毒壅盛组改变了，可以表达ACTH ！这会产生什么结果呢？ β-END ACTH 外显子3 外显子2 外显子1 ↑ ↑ ↑ ↑ ATG ATG --------------------------------------- ACTH -------------------------------------------------- ATG ------------------- β-END ---------------------- ATG 荷瘤小鼠肾上腺的RT-PCR表明，肾上腺POMC基因也存在剪接差异，其中第3、5泳道（分别为早期气虚、中晚期气阴阳虚）出现220bp左右的PCR产物，正好是第二外显子（180bp）剪接掉的结果。 实验24 cDNA Array 与基因芯片原理类似的有cDNA Array。例如CLONTECH Laboratories公司的Atlas cDNA Expression Arrays是其代表。其cDNA Array的矩阵点由肉眼可见大小的cDNA点组成，点于96孔板大小的硝酸纤维素膜上。工作原理是，抽提组织的总RNA或进一步分离mRNA，用反转录酶和同位素反转录mRNA成cDNA探针，与膜上的cDNA杂交，放射自显影。不同的组织分别用一张膜。其放射自显影结果可以用肉眼识别。该公司还配套有分析软件，实验结果扫描后可以通过软件比较不同组织基因转录的差异。因此该Array的优点为1）不要求专用仪器设备，一般实验室均可以操作。2）实验结果肉眼