生物药物综合实验--肌苷的摇瓶发酵ppt摇篮发酵.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 北京电子科技学院----生物系 生物药物综合实验 王维彬 实验 六 肌苷的摇瓶发酵 实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题 掌握摇瓶发酵的基本方法 明确摇瓶发酵对生产的指导意义 实验目的 肌苷是有一定医疗价值的药物．可用于治疗肝脏、心脏疾病，白血球、血小板减少症；中心神经膜炎、视神经萎缩等疾病及放疗造成的血小球减少症；此外．还可作为合成抗病毒药和食品呈味剂的原料。 发酵是微生物菌体合成和积累代谢产物的过程。发酵过程中各种酶系统发生作用，产生一系列生化反应，而各种酶系统的活性受各种因素影响，发酵水平的高低，除受菌种限制外，发酵过程控制也有着极为重要作用，只有良好的外因条件，才能使菌种固有的优良性能得到充分的发挥。为此通过摇瓶发酵试验，研究最佳的发酵条件，如培养基、温度、发酵周期、通气、PH?等。 实验原理 材料：枯草杆菌 试剂：（1）斜面培养基: 葡萄糖 1% 蛋白胨0.4%，酵母膏0.7%， 牛肉膏1.4%，琼 脂 2%，pH7（用1～2N的NaOH调）。 （注意调完pH后再定容，再加琼脂） （2）pH7种子培养基： 葡萄糖 2%， 蛋白胨 1%，酵母膏 1%， 玉米浆0.5%， 尿素 0.5%，氯化钠0.25%， pH7（用1～2N的NaOH调）。 （3）发酵培养基： 葡萄糖10%，酵母膏1.5% ,玉米浆0.8%，尿素0.5%， 氯化钾0.25%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.5%，消沫剂0.5ml/L（摇瓶发酵泡沫少，可不加），pH7（用1～2N的NaOH调）。 ? 实验器材 仪器：灭菌锅、超净工作台、摇床、显微镜、定氮仪、糖量剂、粘度计、紫外分光光度计、PH测定仪、离心机、生化培养箱、250ml三角瓶、接种针、试管、移液枪、移液管（0.1ml、0.5ml、5ml）100ml量筒等. ? 1.斜面培养基配制 称量斜面培养基原料,葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏用60ml水溶解后，调PH，定容于100ml容量瓶中，溶液加热加入琼脂溶解，放多层纱布趁热进行过滤，分装，分装装量为管高的1/5，培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。灭菌条件121℃20min，培养基经灭菌后，立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜。（有必要可以做培养基无菌测试） 2.种子斜面培养： 用接种针从冷冻管中挑取单菌落，在无菌条件下接入灭菌后的斜面培养基上，进行培养（大约10h左右）。 实验方法及步骤 3.种子配制： 如斜面培养基配制，过滤要用滤纸。 4．种子扩大培养： 用接种环从斜面挑取单菌落，在无菌条件下接入灭菌后的250ml装有25ml液体种子培养基的三角瓶中，往复式摇床冲程3cm，频率120次/min,37℃培养z至对数期（大约10h左右）。 5.发酵配制： 如种子培养基配制。 6．发酵培养： 用移液枪取种子培养液体3ml，在无菌条件下接入灭菌后的250ml装有25ml液体种子培养基的三角瓶中，往复式摇床冲程3cm，频率120次/min，37℃培养72h。 实验方法及步骤 7．发酵液分析： 显微镜观察菌种形态。 糖量计测定种子液残糖量。 PH测定仪测定发酵液酸碱度。 紫外分光光度计测定580nmDO值：发酵原液于玻璃比色杯中，紫外分光光度计测定580nmDO值 紫外分光光度计测250nm、260nmOD值：发酵液于4000转/分离心机中离心10～15分钟，取上清液稀释适当倍数，于石英比色杯中，紫外分光光度计测定250nm、260nmOD值。 实验方法及步骤 斜面培养基配制 种子培养基配制 发酵培养基配制 接 种 接种 斜面培养 接种 摇床培养 摇床发酵 PH测定 可见光测定 紫外光测定 糖量计测定种子液残糖量 实验方法及步骤 斜面培养基配制