luminex操作步骤.docVIP

未提供的所需材料 试剂 Luminex鞘液（Luminex编号#40-5000） 仪器/材料 1、25ul-1000ul可调移液器 2、5ul-50ul或25ul-200ul排枪 3、试剂管 4、EP管 5、橡皮圈 6、吸水纸 7、实验室用振荡器 8、超声波破碎仪（Branson#B200型超声清洗器或类似仪器） 9、专用摇床（Lab-Line#4625型或类似仪器） 10、真空过滤单元（(Millipore编号#MSVMHTS00多孔真空装置或Millipore编号#WP6111560真空泵或类似仪器） 11、Luminex 100? IS, 200?, 或Luminex公司产HTS 12、板架（Millipore编号# MX-STAND，可用洁净96孔板代替） 安全注意事项 1、所有血液制品及生物制剂都具有潜在危险性。在运输和处理传染原时须严格遵守疾病防控中心和职业卫生安全署所制定的防护措施。 2、叠氮化钠或Proclin可作为防腐剂加入某些试剂中。虽然其浓度很低，但是叠氮化钠或Proclin可与铅和铜反应形成具有高爆炸性的金属叠氮化合物，可用大量水冲洗以防止叠氮化合物的形成。 技术指南 为获得可靠的和可重复的实验结果，在开始实验操作前，操作者必须仔细研读整个指南并完全理解每一步实验操作的各个方面。在实验开始前，应复习回顾并理解以下要点。 本产品只可用于实验，不可用于诊断。 过期后请勿使用。 不可与其他来源的试剂混合或用其他试剂代替本试剂。 抗体标记微球对光敏感，必须避光保存。在孵育期时，需用不透光板覆盖试剂板或用铝箔包裹。 试剂在使用前须复温至室温（20-25摄氏度）。 在实验开始后或孵育期间，任何物体不能直接接触实验滴定板的底部。为保证板子悬空放置，可使用洁净96孔板放置于实验板下部，并使用胶带固定。 清洗不净可对结果产生不利影响。所有清洗都必须用Wash Buffer。 清洗之后用滤纸吸干实验滴定板底部以保证其清洁，防止因毛细现象引起的渗漏。 在板上使用真空吸引器时尽可能低流量，推荐每移除200ul缓冲液的时间≥5s（相当于100mmHg） 10、在用双蒸水溶解后，所有的标准品及对照品都必须移至EP管中。 11、配制的系列稀释标准品必须在1小时内使用。弃用剩余的稀释标准品。标准品原液可以在-20摄氏度保存1月，在-80摄氏度可保存1月以上。 12、如果样品处在本试剂的浓度范围之外，请适当稀释样品并重复本过程。 13、已混合但未使用的抗体标记微球可置于混合瓶中保存，在2-8摄氏度条件下最多可保存1月。 14、在标准曲线的制备过程中，请确保先混合高浓度再配制低浓度，每一个浓度配置时请更换新的移液器枪头。 15、配液完成后请立即读数，如不能立即读数，请用铝箔或不透明盖封闭板子，在2-8摄氏度条件下保存至多24小时。读数前，室温下将板子置于摇床上晃动10分钟，推迟读数可造成对某些细胞因子和炎症趋化因子的敏感性降低。 16、摇床速度应设定在不使液体溅出的条件下的最大转速，对于推荐使用的摇床而言，速度设定在5-7，大约500-800rmp。 17、确保针状探头清洁，其有可能碰到超声破碎仪或酒精流。在含量测定读数之前，根据Luminex推荐的方案调节枪头的长度，用配套的3个校对盘进行调整。 18、对细胞培养的上清液和组织提取液而言，在背景孔、标准品孔及质量控制孔中，应使用细胞培养或组织提取液作为基质溶液。如果样品经过Assay Buffer稀释，则使用该缓冲液作为基质溶液。 19、对于血浆/血清样品，应使用配套的血清基质。 20、对细胞/组织匀浆，应保证最终的匀浆在缓冲液中有中性的Ph,最小量的洗涤剂或强变性洗涤剂，符合生理浓度的离子浓度。避免组织残渣、脂类、细胞/组织的聚集。使用前离心样品。 21、在加入板子之前，所有试剂应混匀。 样品收集及保存 血清样品的制备： 让血液凝固至少30分钟以上，1000g离心10分钟，移出血清后立即进行测定，或分装后在≤-20摄氏度条件下保存。 避免多次冻融（2）。 对于冰冻样品，在使用前应充分融解，混匀后离心。 在测定前，推荐3000g离心样品5分钟。 大鼠血清应使用血清基质稀释5倍以作为样品稀释液。每1份大鼠血清混入4份血清基质（例如12ul大鼠血清加入48ul血清基质中作为平行双样）。或者在Ⅸ部分的第8步，免疫测定阶段，在每个样品孔中加入20ul血清基质、5ul未稀释的血清样品。为测量某些血清样品中的预计的高浓度RANTES和GRO/KC，可能需要进一步稀释（例如1:20）。 血浆样品的制备 血浆收集时推荐使用EDTA作为抗凝剂。对30分钟内收集的血液标本1000g离心10分钟。移出血浆后立即进行含量测定，或分装后在≤-20摄氏度条件下保存。 避免多次冻融（2）。 对于冰冻样品，在使用前应充