天然药物化学第二章--糖和苷1.pptVIP

(四)单糖间连接位置的确定 将糖苷全甲基化。然后水解，其中，甲基化糖中所游离-OH的位置，即为连接位置。该游离-OH位置，可用气相或NMR谱确定。 (五)连接顺序的确定 1、一种方法；即缓和水解法(稀酸水解)，酶解，乙酰解，碱水解等方法，将糖链水解成较小的片断，然后分析这些片断，则可确定其连接顺序。 2、质谱法：由质谱裂解的糖碎片，通过分析，也可以推测低聚糖或苷中糖链的顺序。 此外，还有最近提出的方法，全乙酰化皂苷糖部分，通过1H-NMR或通过2D-NMR等方法。 第七节 糖和苷的提取分离 糖和苷类由于糖上含有多个-0H，极性较大，但随着糖的聚合度增大，其性质也有较大变化，如多糖，一般为非晶体，无甜味，水溶性降低。因此，不同糖类，提取方法也不完全相同。 一般说；要提取原生苷要注意以下几点： 1、由于植物中含有水解酶存在的作用，提取时易使原生苷水解成次生苷，为防止起见，首先应破坏酶，常用破坏酶的方法有；沸水处理或加CaCO3等。 2、原料新鲜采集的，迅速干燥，不但糖类不宜久受高温，遭受破坏，而且当温度逐渐上升之际，反而促进酶的水解作用。 3、糖类提取分离难度较大，并结晶也很难得到。? 一、提取 提取方法： 通常采用水或乙醇提取，所得提取物经石油醚脱脂，氯仿或乙醚提取苷元，乙酸乙酯提取苷 (单糖苷或少糖苷)，再用正丁醇提取多糖苷。 二、分离、精制 (一)沉淀法 1、铅盐沉淀法 铅盐在提取分离中，是一种应用比较广的沉淀试剂，在提取液中入不同的铅盐，可使相应的成份沉淀析出。 中性醋酸铅可使一些酸性，酚性成份沉淀析出，如：有机酸、蒽醌、鞣质、黄酮等。 碱式醋酸铅沉淀范围更广，更彻底，如葡萄糖醛酸，半乳糖醛酸，肌醇醇等。 铅盐的应用，一是沉淀杂质，滤出杂质后，母液用H2S等脱铅，再进行下一步处理。 二是用铅盐沉淀有效成份，产生的沉淀滤出后，混悬在水中，脱铅，亦可得到较纯的多糖。 2、铜盐沉淀法 多糖提取液也可用不溶性铜复盐提取，用Felling试剂以沉淀多糖的例子较多，特别是甘露聚糖，木聚糖。其它也有用CuCl2，CuSO4，CuAc2等，最后，以H2S分解去铜盐，即得到较纯的糖。 3、季胺氢氧化物沉淀法 系采用季胺氢氧化物与酸性多糖产生沉淀，再将得到的沉淀分离，可得多糖，此法常用于分离酸性多糖。 (二)纤维素柱色谱 纤维素柱色谱对多糖的分离既有吸附色谱的性质，又具有分配色谱的性质，所用的洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱的先后顺序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最后出柱，与分级沉淀法正好相反。 (三)活性炭柱层法 在糖类分离中，活性炭是最常用的方法，其优点是： 1、吸附量大，分离效果好。 2、价格便宜，且选择性高。 缺点是： l、粒太细，流速太慢，所以活性炭柱层时要加入硅燥土(一般为1：1)，助滤，以增加流速。 2、活性炭黑色，看不到分离情况。 应用方法：一般是糖溶液上柱后： 1、先用水洗脱单糖， 2、用不同浓度的乙醇，逐渐洗脱二糖、三糖及低聚糖，乙醇浓度提高，洗脱的低聚糖分子量也相应增大。 注意点： 1、活性炭中常含有Fe+++，ca++，Na+等离子，这些金属离子存在占据了吸附表面，影响分离效果，应用前，最好先处理去。一般是用0．2mol／m1枸椽酸或2-3molHCl洗，再用蒸溜水洗至中性即可。 2、对吸附过强的糖类，洗脱有困难，此时可用吸附力更强的物质，如：麻黄碱等进行取代层析。 (四)离子交换层析 植物水提取液经硅燥土助滤后，流经阳离子和阴离子树脂柱，去掉离子性杂质，如无机盐，酸根等。 所用的阴离子交换树脂，宜用弱碱性的，强碱性的能与还原糖结合，用水不能洗脱，须用1O％NaCl水溶液才能洗脱，但易使糖变构或降解成乳酸，就象强碱对糖的作用一样。 强酸型阳离子交换树脂对吡喃醛糖苷键无影响，但对呋喃糖苷键不安定，有被水解的危险。 (五)凝胶过滤法 凝胶过滤法，主要根据糖分子量大小进行分离，根据具体情况，选用不同孔隙的凝胶，即可得满意的分离。 (六)制备性区域电泳 分子大小、形状及所负电荷不同的多糖其在电场的作用下迁移速率是不同的，故可用电泳的方法将不同的多糖分开，电泳常用的载体是玻璃粉。具体操作是用水将玻璃粉拌成胶状、装柱，用电泳缓冲液平衡3天，将多糖加于柱上端，接通电源，上端为正极，下端为负极。电泳完毕后将玻璃粉载体推出柱外，分割后分别洗脱、检测。该方法分离效果较好， 只适合于实验室小规模使用，且电泳柱中必须有冷却夹层。 (七)分级沉淀或分级溶解法 方法是： 1、改变溶剂组成，如：水中不断改变乙醇浓度，使多糖分离。 2、改变PH值。 3、改变温度，逐渐冷却的方法。 4、改变无机盐的浓度，盐析法，无机盐的浓度不同，析出分子量大小也不同。 该方法：1、分子量范围大