第6章从杂交育种到基因工程第6章从杂交育种到基因工程0章节(4903KB).pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoliI内切酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG ２、基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 3、基因的运输工具——运载体 　　运载体必须同时满足三个要求：①具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;②能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；③具有标记基因,便于进行筛选. 3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 标记基因，便于进行检测。 质粒存在于许多细菌和酵母菌等微生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　 　　用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 目的基因与运载体结合 三、基因工程基本步骤 获取目的基因 提取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 ⑵人工合成基因法 DNA合成仪 有两种方法：　　　　　①逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。　　②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 将目的基因导入受体细胞 导入 扩增 常用的受体细胞：菌类和动植物细胞 目的基因的表达和检测 　　检测:检测标记基因的有无. 表达:根据特定性状的产生与否来确定. 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　 第一步：获取目的基因 基因工程基本步骤： 第二步：目的基因与运载体结合 第三步：将目的基因导入受体细胞 第四步: 目的基因的表达和检测 ⒈要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是　 ①限制酶　②连接酶　③解旋酶　④还原酶　　　 Ａ．①②　Ｂ．③④　Ｃ．①④　Ｄ．②③ 2.基因工程的正确操作步骤是①使目的基因与运载体结合　　②将目的基因导入受体细胞　③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求④提取目的基因 Ａ． ③②④① 　　Ｂ． ②④①③　　　　　Ｃ． ④①②③ 　 　Ｄ． ③④①② 3.实施基因工程的第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。一种限制性内切酶能识别ＤＮＡ分子的ＧＡＡＴＴＣ顺序，切点在Ｇ和Ａ之间，这是利用了酶的 Ａ．高效性　　　　Ｂ．专一性　　　 Ｃ．多样性　　　　Ｄ．催化活性易受外界影响⒋采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是①将毒素蛋白注射到棉受精卵中　　②将编码毒素蛋白的ＤＮＡ序列，注射到棉受精卵中　③将编码毒素蛋白的ＤＮＡ序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，在进行组织培养④将编码毒素蛋白的ＤＮＡ序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中Ａ．①②　Ｂ．②③ Ｃ．③④ Ｄ．④① 　　 水母 一、基因工程与作物育种 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 导入贮藏蛋白基因 的超级羊