食源性致病菌PCR检测中常用的靶基因及其参考引物.docxVIP

宋艳，李建林，郑铁松!（南京师范大学金陵女子学院，江苏南京!##$%）摘要：’()方法检测食源性致病菌在敏感性、特异性与速度上都具有很大优势，在其应用过程中，选择的靶基因和由此设计的引物序列直接影响方法的特异性和灵敏性。综述了大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌及其他常见的食源性致病菌在’()检测中常用的靶基因及其参考引物，以供相关研究者借鉴。关键词：’()，食源性致病菌，靶基因，引物#$%’$()*()+%*,(-./)01%),*(,,#0(*%.2#)*3%456.%*%*0#-#22##.7#)-%/(*3#+%-!#$%’，()*+’*,+’，-./#$0+1*23’4!（+,-.,-/(0..1/1，23-4,-/20563.7-,8159,:;，23-4,-/!##$%，(,-3）87,*)(*：!#$%’#(#)(*+,+--++’.+/,#01(+2#,*3/10*’，1))4/1(#，30#)*-*)1,’3#,3*(*5#=6+7#)471/(1/2#(31,’0/*8#/3*133+)*1(#’)+47’#--#)((#30#)*-*)1(*+,1,’3#,3*(*5*(9+-$%’#(#)(*+,’*/#)(79=!#010#//#5*#:#’(#3(4’*#3+,(#8+7#)471/(1/2#(31,’0/*8#/3*133+)*1(#’-+/(#$%’#(#)(*+,+-!#$%’#$’(#)*’，+(*,)-%**(，+.(/$0*)#)##1(1%1，+$’2%**(1,’+(#/-++’.+/,#01(+2#,，:*):+47’.#12/#1(0++7+-*,-+/81(*+,/#3+4/)#3(+3#7#)(30#)*-*)(1/2#(3-+/(#$%’#(#)(*+,=9%:;#).,：$%；-++’.+/,#01(+2#,；8+7#)471/(1/2#(；0/*8#/3中图分类号：?!#=文献标识码：@文章编号：##!*#A#B（!#）#*#A%*#B’()（’0.;615391(3,-)13E:,0-）即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定基因或F2@序列的方法。利用’()方法对食品致病菌进行检测在敏感性、特异性与速度上都具有很大优势。随着对一些主要食品微生物遗传性质了解的逐渐深入，许多致病菌的遗传背景进一步明了，’()技术在食品检测中也更加显示出其应用前景。’()技术检测食源性致病菌的特异性，取决于所选择的扩增靶序列是否为其待检菌高度保守的特异性片断。因此，选择靶序列和由此设计的引物序列直接影响方法的特异性和灵敏性，随着’()技术在食源性致病菌中的广泛应用，对此也就提出了更高的要求。本文综述了在食源性致病菌’()检测中常用的靶基因及其参考引物，以供相关实验工作者借鉴。因组F2@特异性保守序列（检测靶点）而设计出来的寡核苷酸序列。’()原理是首先将靶F2@双链加热变性为单链，加入两段人工合成的引物；引物与互补的F2@单链碱基互补结合后，在有F2@聚合酶和D种G2’底物存在的情况下，引物沿模板F2@链按HI’AI方向延伸，自动合成新的F2@双链。新合成的F2@双链又可作为扩增的模板，继续重复以上的F2@多聚酶链反应。经过!HJAH次循环，可将靶F2@序列扩增近百万倍。因此检测靶点与根据检测靶点所设计的恰当序列的引物，对于’()检测的准确性和敏感程度来说是至关重要的。而且在近年的研究实践中发现，检测靶点的特异性不强是导致其’()检测结果出现假阴性或假阳性结果的主要原因。=引物在456中的作用引物对’()扩增的特异性起着关键的作用，引物的优劣直接关系到’()扩增的特异性和成功与否。靶序列的选择是决定’()结果的关键因素，选择是否准确则取决于对所检测对象的遗传背景的了解。引物序列则决定’()产物的大小、位置、产量以及扩增区域的6值和扩增产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异性产物的产生，得到的引物产量也可接近反应指数期的产量理论值，而差的引物可能会很少产生目的产物甚至概述=456及引物’()（’0.;615391(3,-)13E:,0-）是一种在体外快速扩增特定基因或F2@序列的方法，又称为基因的体外扩增法。’()用到的引物是根据目标细菌基收稿日期：!##$*!*#C!通讯联系人作者简介：宋艳（$CD*），女，在读硕士研究生，主要从事食品生物技术及食品安全方面的研究。!#没有，也可能会产生非特异性产物。显然靶序列的选择和引物的设计是!#检测实验成功与否的关键。据目前研究报道来看，引物基本上是根据待检测菌的一段已知序列设计的，并且大多数是根据属特异靶序列设计的。!#引物选择设计的原则!#引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片断，使其能有效扩增模板$%。靶基因