象草幼穗离体培养植株再生研究.PDFVIP

维普资讯 第 16卷 第 3期 草 业 学 报 43— 48 Vol_16，No．3 ACTA PRATACULTURAE SINICA 6／2007 象草幼穗离体培养植株再生研究 钟小仙 ，佘建 明 ，顾洪如 ，张建丽 ，倪万潮 (1．江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏 南京 210014；2．江苏省农业科学院农业生物遗传生理研究所，江苏 南京 210014) 摘要：以象草幼穗为外植体材料、改 良的MS为基本培养基，研究了不同外源激素组合对不同发育时期幼穗愈伤组 织诱导和植株再生能力的影响。结果表明，象草幼穗离体培养最适长度为2～5am；愈伤组织诱导培养基中添加 4．0mg／L2，4一D+0．05mg／LKT和 4．0mg／L2，4-D+O．10mg／LKT时，颗粒状愈伤组织诱导率分别为79．0 和 72．6 ；转入添加 3．0mg／L2，4一D+O．2mg／L6-BA的继代培养基 ，分别有 40．9 和74．0 的愈伤组织保持颗 粒状结构；在添加 2．0mg／LCPPUq-0．01mg／LNAA和 0．50mg／LKT+O．5mg／LIAA 的分化培养基上，经过 继代培养后的颗粒状愈伤组织的成苗率分别为 36．4 和 38．5 ，总成苗率达 5O．2 和 43．9 。3片叶大小的幼 苗转入附加NAA0．50mg／L的 1／2MS壮根培养基，试管苗移栽成活率达 95 以上。在继代培养过程中逐代选 择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织，是提高其植株再生能力的有效方法。 关键词：象草；幼穗；离体培养；愈伤组织；植株再生 中图分类号：Q945．39 文献标识码 ：A 文章编号：1004—5759(2007)03—0043—06 象草(Pennisetumpurpureum)为禾本科狼尾草属多年生草本植物，原产于热带非洲，是适宜于热带和亚热 带地区种植的高产牧草 ～，可用于草食畜禽养殖 。]、公路护坡 引、中高档纸浆生产 “，近年来的研究表明，象 草还是一种理想的生物质能源作物，国内外种植面积有迅速扩大的趋势[8~1¨。但 由于象草为对光照敏感的短 日 照作物，只能在北纬 28。以南地区正常开花完成生育过程及 自然越冬n引，在长江中下游及其相同纬度地区主要作 一 年生利用，不能 自然开花结实，在生产上采用种茎无性繁殖的方法提供种苗，且缺乏抗寒、耐盐性强的象草品 种，影响其大面积推广种植。 迄今为止，国内外尚未见象草幼穗组织培养植株再生的报道 。本研究以象草NSI幼穗为外植体材料，试图 探明不同激素组合对不同发育时期幼穗的愈伤组织诱导和植株再生能力的影响，以期建立起体细胞培养植株再 生技术体系，为实现象草工厂化试管苗生产和利用生物技术培育抗寒、耐盐新品种奠定基础。 1 材料与方法 1．1 材料 象草N51，1985年从美国引进，种茎无性繁殖保存，大田扩繁。参照陈礼伟等[13]短 日照处理方法，对象草暗 处理3周后，取象草的幼穗进行离体培养。 1．2 培养基 基本培养基由MS无机盐和B5有机成分组成，添加不同配比的激素组合，附加3 蔗糖和0．8 琼脂，pH值 为5．8。 愈伤组织诱导培养基和继代培养基添加设置不同的激素组合 (表 1)。绿苗分化培养基添加的激素组合为： SG ，附加苯基脲类细胞分裂素(CPPU)2．0mg／L+萘 乙酸 (NAA)0．01mg／L；SG。，附加激动素 (KT)0．50 mg／L+吲哚乙酸(IAA)0．5mg／L。壮根培养基为Rr：1／2MS培养基，添加NAA0．50mg／L。 1．3 培养方法 剪取植株上半部，去掉叶片，在无菌条件下用 7O 的酒精擦拭包在幼穗外部的叶鞘和茎，剥出幼穗。幼穗长 度小于2am，直接接种 ；幼穗长度 2～5am，切成 2～3mm长的穗段；幼穗长度超过 5am，则取幼穗基部 5am 以 内和以外两部分，同样切成 2～3mm长的穗段。 幼穗接种于诱导培养基上20,--,25d后，将愈伤组织转入继代培养基增殖。继代 20~25d后转入分化培养 收稿日期：200