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玛咖功效成分玛咖酰胺的超声辅助提取工艺研究陈金金1”，董贝涛。2，赵庆生1，王丽卫1，王强3，赵兵1’+ (1．中科院过程工程研究所，北京100190；2．中国科学院大学，北京100049；3．北京中科健宇生物科技有限公司，北京，100083) [摘要]在单因素试验基础上采用晌应面法(RSM)进行玛咖功效成分玛咖酰胺的超声提取工艺优化，用高效液相法(HPLC)测定玛咖酰胺含量。试验结果表明玛咖酰胺的最佳条件为：提取溶剂为石油醚，料液比为20ml·g～，提取时间为30min，提取温度为50℃，超声功率为800w。在最佳提取条件下，丽江产玛咖中功效成分玛咖酰胺的提取量为204．87mg·100g～。本研究为玛咖中功效成分玛咖酰胺的生产提供了一种高效有益的方法，为玛咖酰胺的开发利用提供了技术支持。玛咖(LepidiummeyenHWalp．)为十字花科(Brassicaceae)独荇菜属(Lepidium)一年生草本植物，原产南美洲海拔3500—4500m的安第斯山脉[1]。我国于2002年开始在云南丽江引种种植，随后相继在新疆、四川、山西及辽宁等地区种植成功。玛咖具有丰富的营养价值与药用价值，富含蛋白质、多糖、氨基酸和矿物质等。研究表明玛咖具有提高人畜生育能力、改善性功能、抑制前列腺增大、抗疲劳、抗抑郁、改善骨质酥松、提高记忆力等作用[2]。玛咖酰胺是一类目前仅在玛咖中发现的次级代谢物，具有神经保护及内源性大麻素系统调节等功能[3，4]。由于玛咖酰胺标准品及检测条件的限制，目前关于玛咖酰胺提取 优化的研究很少，仅有少数几个报道简单采用甲醇或石油醚进行提取[5，6]。本 研究中，以本实验室制备的玛咖酰胺对照品及建立的玛咖酰胺高效液相检测方法 为基础，结合本实验室自行研发的超声循环提取设备，进行了玛咖酰胺提取条件 的优化，以期为玛咖活性成分玛咖酰胺的生产提供一种高效的提取工艺，为玛咖 酰胺的活性研究及综合利用等提供基础。1材料与方法1．1材料玛咖干粉由云南省丽江格林恒信生物科技开发有限公司提供。液相用超纯水 为哇哈哈纯净水，乙腈购自Fisher公司(USA)。其他试剂均为国产分析纯。1．2仪器项目支持：国家“863”项目(2012AA021702．4)；丽江地方科技计划(玛咖检测方法及相关 质量标准研究)。+通讯作者：赵兵，E-mail：bzhao@ipe．ac．cn71D100超声仪(北京弘祥隆生物技术股份有限公司)，Re一6000旋转蒸发仪(上 海亚荣生化仪器厂)，SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，MB23水分分析仪(美国奥豪斯公司)，岛津LC-20A高效液相色谱，反相C18柱(WatersXTerraC18，250mm×4．6mm，5um)o1．3试验方法1．3．1原料预处理 由于原料玛咖干粉颗粒不均匀，利用粉碎机将其粉碎后过40目筛，并利用水分分析仪进行水分测定后用于玛咖酰胺的提取。 1．3．2玛咖酰胺的提取称取10g左右的样品并记录下准确重量(0．0001)，加入一定体积的提取试剂，一定条件下超声提取，5000g离心lOmin，取上清液旋蒸干后乙腈溶解，过0．22um滤膜后进行HPLC检测。1．3．3玛咖酰胺含量测定 玛咖样品中主要已知酰胺种类为8种，其结构式及其在玛咖样品中的HPLC色谱图如图1所示。液相检测条件为岛津LC-20A，反相C18柱，进样量10u1，柱温30℃，流速0．6ml／min，A相为纯水，B相为乙腈，等度洗脱，0-35min，90％乙腈。检测波长为210矿弋厂—孓一、—～蛐t∥弋厂措轧nm。01轧一—～～^√氓少子摹芝蕊飞po一≯一一～且~~~7‘k√～／、。01轧——～——～I·。’”≈-‘”。”6“““““如o一一一一一一气～‰＼—／、t()一抖摹一一、——一、一、一h051O1520253035图1玛咖中主要的8种玛咖酰胺结构式及样品中玛咖酰胺HPLC色谱图。9和 10为未知玛咖酰胺，a．f为脂肪酸。81．3．4单因素试验 以提取得到的总玛咖酰胺量为指标，分别考察不同极性提取溶剂(甲醇，乙酸乙酯、石油醚)，超声时间(5、15、30、45、60rain)，提取温度(20、30、40、50、60℃)，超声功率(200、400、600、800、1000W)和固液比(20、30、40、50、60ml-gq)对玛咖酰胺提取效果的影响。1．3．5提取工艺响应面法优化在单因素试验基础上，采用Box-Behnken试验设计方案，以超声时间(x。)、 提取温度(x2)和超声功率(X。)为考察变量，以玛咖酰胺提取量(Y)为响应值，应用Design-Expert8．0．6软件建立数学回归模型，确定最佳超声辅助提取工艺参数。2．结果与分析2．1单因素实验结果与分析2．1．1不同极性溶剂对玛咖酰胺