第十六章节肝胆疾病的生物化学检验幻灯片.pptVIP

中华医学会推荐法测定碱性磷酸酶（37℃） * （1）PNPP的纯度对测定结果影响很大。合格的PNPP所含杂质应尽量低，要求：游离4-NP小于0.03%，无机磷小于1%。 （2）各类分析仪的波长设置与4-NP的摩尔消光系数。 （3） 底物有一定自身水解作用，酶活性计算时应扣除试剂空白变化速率。 （4）用于ALP测定的缓冲液分为三类： ①惰性型：如碳酸盐缓冲液和巴比妥缓冲液 ②抑制型：如甘氨酸缓冲液 ③活性型：如AMP、Tris和DEA缓冲液。 γ-谷氨酰基转移酶测定 （1）L-γ-谷氨酰-α（β）-萘胺做底物，催化生成的α（β）-萘胺与重氮试剂生成红色化合物。该法简便，试剂易得，采用定时法，适合一般分光光度计应用。但反应时间长，灵敏度低，底物溶解度差，在基层医院还在使用。 （2）γ-L-谷氨酰对硝基苯胺（GNA）做底物，催化生成的对硝基苯胺在碱性环境下呈黄色，可以连续监测。但底物溶解度差，达不到最适条件对底物浓度的要求，曾经作为AACC和SSCC的推荐法。 （3）3-羧基-γ-L-谷氨酰对硝基苯胺（GCNA）做底物，催化生成的对硝基苯胺在碱性环境下呈黄色，可以连续监测。 * IFCC推荐法测定γ-谷氨酰基转移（37℃） * （1）反应温度37℃时的最适pH为7.70，以甘氨酰甘氨酸和氢氧化钠做缓冲体系。 （2）5-氨基-2-硝基苯甲酸在410nm的摩尔消光系数为7.96 ×103（pH为7.70），受pH和温度影响较大。。 （3）GCNA的纯度要求较高，对硝基苯胺应小于0.5%，5-氨基-2-硝基苯甲酸应小于0.1%，否则需先纯化。 （5）底物有一定自身水解作用，酶活性计算时应扣除试剂空白变化速率。 （三）反映肝脏合成能力的酶类——胆碱酯酶的测定 胆碱酯酶是一类催化酰基胆碱水解的酶类，又称酰基胆碱水解酶。 按照分布不同和理化性质不同可分为两类，（1）假性胆碱酯酶（即血清胆碱酯酶）：由肝脏合成，测定其血清中的酶活性能反映肝脏合成功能；有机磷中毒时酶活性也被抑制，作为有机磷中毒的辅助诊断指标。 （2）全血中乙酰胆碱酯酶：反映真性胆碱酯酶的活性，是有机磷中毒的诊断指标。 * （四）反映肝纤维化为主的酶类 1.单胺氧化酶（MAO) MAO是较早用于肝纤维化诊断的项目。MAO主要来自线粒体，其活性增高与体内结缔组织增生密切相关。80%肝硬化患者MAO增高。如果肝癌患者MAO增高，表明该患者同时伴有肝硬化。 2.β-脯氨酸羟化酶（β-PH） * 二、蛋白质合成功能测定 （一）总蛋白（TP） （二）清蛋白（ALB） （三）前清蛋白（PA） （四）凝血酶原时间（PT） * （一）血清清蛋白（ALB） 血清ALB系肝实质细胞合成，占血浆蛋白总量的40%～60%，分子量为66.458 kD，半寿期为15～19天。 急性肝炎时，单纯检测A/G比值无特异性。 慢性肝炎、肝脏有占位性病变和肝硬化时，由于病程较长，肝脏合成清蛋白能力降低。A/G比值发生变化。 * （二）血清前清蛋白 血清PA是由肝细胞合成的快速转运蛋白之一，正常人血清中PA含量为0.28～0.35g/L，约占全部血清蛋白的0.4%。其半寿期很短，仅约12小时 。 临床意义： ①作为营养不良的指标，其评价标准是：PA200～400mg/L为正常，100～150mg／L轻度缺乏，50～100mg／L中度缺乏，＜50mg／L严重缺乏。 ②作为肝功能不全的指标。 ③在急性炎症、恶性肿瘤、创伤等任何急需合成蛋白质的情况下，血清PA均迅速下降。 * 三、肝纤维化生物化学检验 * 1．Ⅲ型前胶原肽 (procollagen Ⅲ peptide, PIIIP) : 血清中PIIIP水平增高代表Ⅲ型胶原合成代谢旺盛，对肝纤维化的早期诊断有意义。 2．Ⅳ型胶原: 血清IV型胶原水平可反映肝纤维化的程度及活动度。急性肝炎时，肝细胞虽严重受损，但无结缔组织增生，故血清IV型胶原水平无明显增加。慢性肝炎、肝硬化等患者血清IV型胶原水平也增高。 3．层连粘蛋白（laminin, Ln）: 测定血清Ln的水平可反映肝窦的毛细胞血管化和汇管区纤维化的程度。肝硬化时血清Ln明显升高。恶性肿瘤和结缔组织病也明显升高。 4．透明质酸（hyaluronic acid, HA） : HA的水平是反映肝纤维化的敏感指标，也是反映肝脏功能的损害程度的指标。恶性肿瘤和结缔组织疾病等血清HA呈非特异性增加。 四、黄疸的生物化学检验 总胆红素：5.1～19. 0μmol/L。 结合胆红素：1.7～6.8μmol/L。 非结合胆红素：1.7～10. 2μmol/L。 结合胆红素/非结合胆红素：0.2～0.40。 1．