第38讲细胞工程幻灯片.pptVIP

* * * 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 　　其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 一.动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 这些组织或器官 上的细胞生命力 旺盛，分裂能力强 细胞贴壁生长 接触抑制 细胞贴壁生长 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞 的接触抑制。 有关概念: 原代培养：指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 贴壁生长细胞分裂生长到相互接触时就停止分裂增殖的现象叫接触抑制 3.动物细胞培养条件： （1）、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） （2）、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） （3）、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 （4）、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 保证细胞顺利的生长增殖 4、动物细胞培养技术应用 （1）、大规模培养生产生物制品（病 毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） （2）、作为基因工程中的受体细胞 （3）、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 （4）、为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 植物组织培养和动物细胞培养的比较 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 供体细胞 （供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵 母细胞 注入 细胞 融合 重组细胞 构建重组 胚胎 胚胎 移植 代孕 母体 生出与供体奶牛遗物质基本相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 核移植过程 2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？ 保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。 1、受体细胞为什么选用卵母细胞？ 卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营养物质。 2.体细胞核移植的过程 P49 讨论： 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。 3.体细胞核移植技术的应用前景 （1）在畜牧业 中可以加速家畜 遗传改良的进程. （2）保护濒危 物种. （3）医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植. 15、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： 1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。 （2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。 动物胚胎或幼龄动物 剪碎 胰蛋白 使细胞与培养液充分接触，便于培养 （3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 ______________