(环境微生物技术)环境检测微生物技术.ppt

BOD生物传感器 测定氨生物传感器 亚硝酸盐生物传感器 亚硫酸传感器 甲烷传感器 10％s9混合液的配制：每10mL由以下成分组成，临用时配制。 磷酸盐缓冲液（0．2mol/L，pH7．4）6．0mL 氯化钾溶液（1．65mol/L）0．2mL 氯化镁溶液（0．4mo1／L）0．2mL 葡萄糖-6．磷酸盐溶液（0．05mol/L）1.0mL 辅酶-Ⅱ溶液（0．025mol/L1．6mL 肝s-9液1．0mL 混匀，置冰浴中待用。 5活化系统（s-9和s-9混合液）的制备 用哺乳动物如大鼠，经诱导剂处理，取肝组织制备匀浆，9000g高心，上清液为s-9组分，与辅助成分以适当比例组成s-9混合液，用作试验中的代谢活化系统。 * 第四章 环境监测微生物技术 分子水平的微生物监测技术 细胞水平的微生物监测技术 微宇宙的微生物监测技术 环境质量的微生物监测技术 环境质量的微生物监测技术 水质的细菌学检验技术 大肠菌群 （一）原理 （二）方法 多管发酵法 初发酵试验 平板分离 复发酵试验 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 膜滤法 滤膜和滤器的灭菌和安装 过滤水样 培养 计数，涂片，染色观察 再培养 细胞水平的微生物检测技术 发光细菌检测技术 （一）基本原理 （二）操作方法 （三）发光细菌检测法的应用 发光细菌 发光细菌是一类在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌，这种可见荧光波长在450-490nm之间，在黑暗处肉眼可见。 多数为海洋细菌(低温，高盐) 发光机理 由细菌荧光酶（LE）、还原性黄素（FMNH2）、八碳以上长链脂肪醛（RCHO）、氧分子（02）参与： FMNH2+LE → FMNH2·LE+ O2 → LE·FM NH2·O2 + RCHO →LE·FMNH2·O2·RCH0 → LE+ FMN +H2O+RCOOH+光 发光细菌急性毒性测试原理 外来受试物主要通过下面两个途径抑制细菌发光： 直接抑制参与发光反应的酶类活性； 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程。 凡能够干扰或破坏发光细菌呼吸、生长、新陈代谢等生理过程的任何有毒物质都可以引起发光强度的变化。变化的程度与受试物的浓度在一定范围内呈相关关系，同时与该物质的毒性大小有关。 发光强度的变化可以用发光光度计测出。 发光细菌急性毒性测试优点 沙门氏菌回复突变试验 （一）目的和原理 （二）步骤和方法 平板掺入试验 斑点试验 TA97、TA98、TA100、TA102 脂多糖屏障丢失 R因子 紫外线损伤修复缺陷 自发回变 回变特性 （三）Ames试验的应用 表4.3 Ames试验测试菌之基因型及生物学性状 菌 株 自发回变 His— rfa pKM101 pAQ1 △uvrB 诊断试验 TA97 90~180 + + + - + + TA98 30~50 + + + - + + TA100 120~200 + + + - + + TA102 240~320 + + + + - + TV - - - - - 分子水平微生物监测技术 一、DNA扩增技术 PCR技术的基本原理 模板 引物 PCR反应 典型的PCR操作 试剂 操作程序 PCR技术检测环境微生物的步骤 从环境样品中提取DNA或RNA PCR扩增 PCR反应产物的检测与分析 PCR在环境微生物检测中的应用 应用PCR技术检测环境中的致病菌与指示菌 应用PCR技术检测环境中的基因工程菌株 PCR技术在环境微生物基因克隆中的应用 微生物酶监测技术 （一）酶活性检测 三磷酸腺苷酶(ATPase)作为多种污染物胁迫的指标 抗氧化剂防御系统与污染物的作用 细菌脱氢酶 （二）酶底物荧光显示法 （三）酶联免疫检测技术 4-甲基伞形酮辛酯酶 沙门氏菌检测 金属巯蛋白的检测技术 基本原理 检测方法 MT检测技术在环境监测中的应用 核酸和蛋白加合物的检测技术 DNA加合物 蛋白质加合物 二、微型生物群落监测法 PFU法 原理 材料及设备 步骤 野外监测 毒性试验 应用泡沫塑料块作为人工基质收集水体中的微型生物群落，测定该群落结构与功能的各种参数，以评价水质。 微生物传感器 酶传感器 微生物传感器 细胞传感器 组织传感器 免疫传感器 生物传感器 10％s9混合液的配制：每10mL由以下成分组成，临用时配制。 磷酸盐缓冲液（0．2mol/L，pH7．4）6．0mL 氯化钾溶液（1．65mol/L）0．2mL 氯化镁溶液（0．4mo1／L）0．2mL 葡萄糖-6．磷酸盐溶液（0．05mol/L）1.0mL 辅酶-Ⅱ溶液（0．025mol/L1．6mL 肝s-9液1．0mL 混匀，置冰浴中待用。 5活化系统（s-9和s-9混合液）的制备 用哺乳动物如大鼠，经诱导剂处理，取