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空肠弯曲菌检验 一、概述 空肠弯曲菌是弯曲菌属中的一个亚种，隶属于螺菌科。 已被认为是引起急性腹泻的重要原因菌。目前已证明为人畜共患病菌，人们食用受到该菌污染的食品和饮用水可引起急性肠炎。 空肠弯曲菌(C.jejuni) 流行病学特征 家畜、家禽肠道正常菌群 传染源 病人，带菌者 ，带菌动物 传播途径 动物→人 密切接触、粪口传播 人 → 人 粪口传播 人群易感性 人群普遍易感 1～5岁儿童发病率最高 所致疾病 1. 婴幼儿急性肠炎 腹痛、水样泻、粘液脓血便 2. 食物中毒 二、生物学特性 ㈠ 形态与染色 本菌为革兰氏阴性多形态菌，螺旋 形，弯曲杆状。大小为（0.3~0.4）μm×（1.5~3）μm，呈S形或纺锤形，菌体一端或两端有单根鞭毛，长度约为菌体的2~3倍，在固体培养基上培养时间过久，如超过48h以衰老的球形菌居多。动力阳性。 ㈡ 培养特性 ⒈初次分离时需要在含5%氧、85%氮和10%二氧化碳环 境中，传代后能在10%二氧化碳环境中生长，在多氧和绝对无氧环境中均不生长。 ⒉培养适宜温度为25~43℃，最适温度为42℃，最适pH7.2。 ⒊对糖类既不发酵也不氧化，呼吸代谢无酸性或中性产物，生长不需要血清，从氨基酸或三羧酸循环获得能量。 ⒋在布氏肉汤中生长呈均匀混浊。 ⒌在血琼脂上，初分离出现两种菌落特征： 第一型菌落不溶血、灰色、扁平、湿润、有光泽，看上去像水 滴，边缘不规则，常沿划线蔓延生长；第二型菌落也不 溶血，常呈分散凸起的单个菌落（直径1~2mm）、边缘 整齐、半透明、有光泽，呈单个菌落生长。当菌种传代后，如遇环境温度不适宜，易出现第二型。 （三）生化特性 注: +为90%以上阳性； d为有的阴性，有的阳性； （-）为一般不生长； -为90%以上阴性； ？为未知。 （四）抵抗力 本属菌抵抗力不强，易被干燥、直射阳光及弱消毒剂等杀灭，加热至58℃经5min可杀死。对青霉素、头孢霉素耐受，对红霉素、四环素、庆大霉素敏感。 （五）致病性 弯曲菌在胆管中生长，小肠上端微需氧环境中适宜本菌生存和繁殖，造成空肠、回肠和大肠组织损伤，通过肠粘膜侵入血液。空肠弯曲菌引起的病变主要在回肠和空肠见斑块样炎症，伴有肠系膜淋巴结炎。 三、检验程序 四、操作步骤 1.样品的采集及处理 （1）肉类、乳类等可疑食品标本 先取10g检样于90mL生理盐水中，用电动搅拌器打碎，静置15min,将上清液以3000r/min离心10min，取沉渣做检验用，接种于Camp-BAP平板上，与42~43℃微需氧培养48h，取出平板鉴定菌落。如1g样品菌量少于102个，此法不能检出。 （2）河水或污水标本 先取水样1000mL，经0.65μm微孔滤膜过滤，再用0.45μm微孔滤膜过滤。取滤膜培养于布氏杆菌肉汤中（含Camp-BAP抗菌剂），经微需氧42~43℃48h培养后，培养液做检验用，用Camp-BAP平板分离。 （3）其他 不论哪种食物样品都应尽快交付检验。如果样品必须运送和保存，应当使用Cary-Blair氏半固体培养基。弯曲菌的存活时间取决于温度，在25℃情况下，其存活时间不到24h或更少，因此样品在原始分离前需放冰箱或冷处保存。 2.微需氧条件的制备 最佳微需氧条件是氧气5%、二氧化碳为10%、氮气为85%。微需氧条件的制备方法有很多种，例如常用的燃烛法、化学法、生物法、气袋法、仪器法等。 带有双相压力计的厌氧罐：在装入平皿密封后，先抽去罐内空气至负压为7.3×104 Pa（550mmHg)处，同样输入上述气体至压力为零。即可放置恒温箱内培养。 3.分离培养 可直接在选择性培养基，如改良Camp-BAP布氏杆菌培养基或Skirrow氏培养平板上划线接种。与42℃培养48h后，观察可疑菌落。 4.初步鉴定 将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。根据菌落生长特征、菌体染色、动力（暗视野或相差显微镜下观察动力明显）、氧化酶和过氧化氢酶阳性者，可初步确定为弯曲菌。 5.确定试验 经初步鉴定后，仍需做下述试验，并且各项试验均应在5%氧气的微需氧环境中培养。 （1）甘氨酸耐受性试验 将分离培养所得可疑菌落接种于甘氨酸培养基中，培养48h，如为阳性，在培养基表面有云雾状生长，则为弯曲菌空肠亚种。 （2）硫化氢生长试