菌种选育(上).pptVIP

在l升烧杯中加入450ml蒸馏水（溶液A）： NH4Cl 0.5g Na2HPO4 3.0g KH2PO4 1.5g 用lN NaOH调整pH到7.4; 制备溶液各50ml： 1M MgSO4.7H2O 20% (w/v)Dextrose(葡萄糖) 1M CaCl2 上述溶液分消。 混合： 1ml MgSO4.7H2O (1 M)，5ml葡萄糖（20%），50ml氯化钙(lM)，450ml溶液A。 ２０世纪６０年代初，前苏联及美国的科学家将植物种子搭载卫星上天，在返回地面的种子中发现其染色体畸变频率有较大幅度的增加。 １９９６年至１９９９年，俄罗斯等国在“和平号”空间站成功种植小麦、白菜和油菜等植物。 三.菌种的衰退与复壮 菌种遗传特性的改变和菌种生理状况的改变 原因： 连续传代 保藏条件及保藏操作不当 菌种的自发突变和回复突变等自身突变 菌种的复壮 菌种的复壮方法 ： 纯种分离,淘汰已衰退的个体 在复壮前，仔细分析和判断菌种是衰退、污染还是仅仅是一般性的表型改变。 防止菌种退化的措施 提供良好的环境条件，减少传代次数 用优良的保藏方法 定期纯化菌种(菌种的复壮) 五种碱基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亚氨基的互变异构。这两种异构体的平衡关系受介质酸碱环境的影响。 （4）亚硝酸 亚硝酸诱变作用主要是脱去碱基中的氨基。A、C、G分别被脱去氨基而成为次黄嘌呤（I）、尿嘧啶(U)、黄嘌呤(X)，复制时，分别与C、A、C配对。 亚硝酸还会引起DNA两条链间交联而造成DNA结构上的缺失，但对其机制还不太清楚。 亚硝酸不稳定，容易分解成水和硝酸酐（2HNO2→N2O3+H2O），硝酸酐继续分解放出NO和NO2（N2O3→NO↑+NO2↑）。 所以，临用前将亚硝酸钠放在pH4.5醋酸缓冲液中，生成亚硝酸（NaNO2+H+→HNO2+Na+）后再用。 （5）N-甲基-N’硝基-N-亚硝基胍（NTG） 亚硝基胍是亚硝基烷基类化合物的一种，可诱发营养缺陷型突变，不经淘汰便可直接得到12％～80％的营养缺陷型菌株，有超诱变剂之称。 pH5～5.5：形成HNO2引起菌种突变； 碱性：以重氮甲烷的形式对DNA起烷化作用； pH=6：两者均不产生，诱变效应可能是由于NTG本身对核蛋白体引起的变化所致。 NTG在缓冲液中较难溶解，而甲酰胺中溶解度较大，用甲酰胺溶解NTG，可提高处理浓度。用300μg/mL NTG 、28oC处理60 min，易得到高产菌株。 （6）航天育种 概念：利用空间环境高真空、微重力和强辐射的特点，在宇宙射线辐射的作用下，使生物的遗传性状发生变异，从而选育出优良菌种。 利用返地卫星或高空气球搭载植物种子进行航天育种，已获得满意结果。 利用航天育种技术进行微生物遗传育种国内尚处起步阶段。 1996年以来，国防科工委863-2办公室相继组织了返地卫星和高空气球搭载微生物、动物细胞和植物种子，为微生物诱变育种提供了新手段。 中国农业科学院航天育种中心(利用航天卫星及地面模拟航天环境因素诱发主要农作物遗传变异) （2）药理活性化合物的筛选 酶靶法： 基本原理：一种化合物如在体外具有抑制代谢过程的某一关键酶的作用，它在体内一般也具有相应的药理作用。 若将体外筛选出的活性化合物，再用动物做实验，可筛选出新的药理活性化合物。 （3）生长因子产生菌的筛选 核苷酸等生长因子的生产不能作为分离步骤中的选择压力，可用随机办法分离产生菌，并通过筛选试验检出产生菌。 例如：通过观察分离株能否促进营养缺陷型的生长，便可检出生长因子产生菌。 （4）多糖产生菌的筛选 曾从各种环境中分离出多糖产生菌，制糖工业污水中可能含有很多这种菌种。 可从菌落的黏液状外观识别这类产生菌。 据统计数据表明，普通初筛，筛选100,000个土壤微生物(放线菌)，只能发现5～50个新化合物，并且不能保证从这些新化合物中一定能发现新药或其他有价值的化合物。 随着生物技术的发展，分子遗传学和基因工程技术的应用，建立在新型靶位基础上的定靶筛选方法，可大大提高新化合物的发现率。 定靶筛选法： 第二节 菌种选育 菌种选育理