HLA检测技术与应用-河南省红十字血液中心精选.pptVIP

河南省红十字血液中心 张伯伟 2012年8月 烟台;血型 HLA概念 检测方法 HLA的应用 HLA与临床输血;血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性标志 血液成分：红细胞，白细胞，血小板，血清蛋白 遗传多态性表现：细胞表面，血浆中的各种特异性蛋白 多态性的遗传基础：基因（染色体上的核酸序列） ;输血治疗的需要促使“血型”发现 15世纪后期开始输血 1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型 1927年发现MN血型系统 1940年发现Rh血型 HLA1958年法国J.多赛发现 ;;免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法 凝集实验：试管法、凝胶柱法、固相吸附、 流式技术 细胞生物学检测方法：混合淋巴细胞培养 分子生物学检测方法：血型基因检测 SSP、SSO、SBT ;人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂的生物学功能，非常复杂的多态性 广范存在于除白细胞表面的其他组织、体液中，与组织相容性有关，又称为组织相容性抗原 ;HLA-I类分子;参与内外抗原肽的处理，呈递． 　　 　　自我识别的信号 　　某些病毒，细菌进入细胞的受体 　　与某些疾病的发病有关,如：B27与强直 性脊柱炎（AS）　;（二）HLA复合体的遗传特征 1. 单元型遗传 2. 多态性现象 （1）复等位基因 （2）共显性表达 3. 连锁不平衡 ;HLA-Ⅰ类分子的分布 1. 存在于有核细胞(含血小板和网织红细胞) 表面。 淋巴细胞 肾、肝脏、心脏 神经组织、成熟的滋养细胞 2. 存在形式 （1）膜结合：有核细胞表面 （2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。 ; HLA-Ⅱ类分子的分布 1. APC B细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞； 2. 其他 激活的T细胞，精子和血管内皮细胞。 ;;TERASAKI 发明的微量淋巴细胞毒实验: 当特异性抗体与HLA抗原结合，激活补体，使淋巴细胞溶解，显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞 用于HLA-I类抗原分型;基于PCR技术的分型方法 PCR-SSP方法 操作简单、灵活 适合少量样本临床病例分型检测 通量较小;PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针） 杂交条???法 基因芯片方法 流式荧光微珠 ;芯片的工作原理;; HLA分型方法 比较项目 PCR-SSP PCR-SSO杂交条 PCR-SSO微珠法 PCR-SSO芯片法 DNA测序方法 技术要求 低 低 较高 高 高 分 辨 率 中低 中低 中高 中高 高 检测通量 低 一般 较高 高 较高 使用设备 少 少 较多 多 较多 环境污染 EB致癌 轻微 轻微 轻微 轻 操作步骤 简单 简单