[工程科技]PCR引物设计.pptVIP

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2018-03-02 发布于浙江
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[工程科技]PCR引物设计.ppt

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[工程科技]PCR引物设计

第一讲PCR引物设计;PCR引物设计的重要性;引物设计原则;PCR引物的寡核苷酸数（长度）;引物顺序;引物的碱基组成;引物中的二级结构;对3’-端的要求;对5’-端的要求;RE位点5’-端应加入的保护碱基;功能基因起始密码（ATG）5’-端前应加入的序列（Kazok序列）;引物的Tm值; Tm(≤20bp, ℃)＝(G+C)×4＋(A＋T)×2 Tm(＞20bp, ℃)＝69.3+0.41 ×(G+C)/N × 100－650/N 式中，G+C和A+T为碱基数 N为引物的核苷酸总数 ;Oligo 6.0分析后的PCR报告;简并引物的设计;第二讲PCR常见问题分析与对策 ;PCR产物的电泳检测时间 ;;模板： ;酶失活： ;引物： ;;Mg2+浓度： ;反应体积的改变： ;物理原因： ;靶序列变异： ;假阳性 ;引物设计不合适： ;靶序列或扩增产物的交叉污染： ;;出现非特异性扩增带 ;出现片状拖带或涂抹带 ;RT-PCR 常见问题 ;; 产生非特异性条带 ; 产生弥散（smear）条带 ;产生大分子量的弥散条带 ;在无反转录酶的情况下，对照RNA获得扩增结果 ;扩增产物滞留在加样孔中 ;为什么使用基因特异性引物（GSP） ;祝大家好运！