薄层色谱法同时测定血清中微量铜铁.PDFVIP

薄层色谱法同时测定血清中微量铜、铁 肖国瑞 方 翔* 福（州大学化学系） 铜、铁均为人体中重要元素，其含量多少影响人体健康，以血清中铜、铁之比值作为标 准进行临床考察及病理研究正 日益受到人们的重视[1]。 本文研究了Cu（Ⅱ）、Fe（Ⅱ）、Fe（Ⅲ）与5-Br-PADAP[2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙 氨基苯酚]金属络合物的薄层色谱特性。提出了同时测定Cu（Ⅱ）、Fe（Ⅱ）、Fe（Ⅲ）和全铁含 量的薄层色谱分析方法。 离子标准溶液，加入 0.2mol/LHAc和0.2 买 验 部 分 mol/LNaAc(PH=4.3)缓冲溶液1ml和1× （一）仪器及试剂 10-3mol/L5-Br-PADAP乙醇溶液0.5ml， 1．仪器：CS-920型高速薄层色谱扫 放置15分钟，显色后，准确加入氯仿 1ml， 描仪 （日本岛津）25型酸度计。 振荡3分钟，静置分层。此时紫红色的金属 2。试剂： （1）铜 （Ⅱ）标准溶液：准确 络合物完全萃入有机相。用玻璃毛细管吸取 称取金属铜 9（9.9％ィ）溶解后，配制成500μ蘥g/ 一定量的有机相溶液，在硅胶-G—羧 甲基 ml铜 （Ⅱ）标准溶液。较低浓度的铜标准溶 纤维素钠涂布的层析板上点样，晾干。将点 液，使用时临时稀释配制。 样后的层析板置于醋酸丁酯—丙酮 7（:3） （2）铁 （Ⅱ）标准溶液：准确称取 展开剂中作上行法展开，待溶剂前沿展开到 FeSO4(NH4)2SO4·6H2O 分（析纯）固体， 10cm处，取出层析板，晾干后，在高速 溶解后，配制成1mg/ml铁 （颍Ⅱ）标准溶液。 扫描仪上进行扫描，测量斑点的吸光度，根 较低浓度的铁标准溶液，使用时临时稀释配 据吸光度与金属离子浓度的关系进行定量测 制。 定。 （3） 5-Br-PADAP溶液：称取5-Br- 结 果 与 讨 论 PADAP 分（析纯）晶体，溶于乙醇 9（5％） 中，配制成浓度为1×10-3mol/L 一（）在不同配比展开剂体系中金属络 （4）薄层层析板的制备：称取一定量 合物和5-Br-PADAP的Rf值： 硅胶-G 薄（层层析用）加入羟甲基纤维素 按照实验方法，金属络合物及5-Br- 钠水溶液，研磨成稀糊状，然后制板，晾 PADAP于层析板上点样后，在一系列不同 干、活化、贮于保干器中备用。贮置超过三 配比的醋酸丁酯ァ—丙酮体系进行上行法展 天，应重新活化后使用。 开，测量计算各自的Rf值。实验结果列于表 NaOH、H2SO4为保证试剂，其他试剂 1。 均为分析纯，按常规法配制。实验用水为去 由表 1可见，在醋酸丁酯—丙酮 7（:3） 离子水。 展开体系中金属络合物之间及显色剂均能达 二（）实验方法 到满意分离。且斑点不拖尾。 于5毫升容量瓶中加入一定量各种金属 *84届分析化学专业毕业生 表 1 不同配比展开剂体系中金属络合物 和5-Br-PADAP的Rf值 二（）扫描波长的选择 实验证明铜、铁金属络合物分别在525 纳米和450纳米具有最大吸收。因此就作为 分别测定铜、铁金属络合物斑点的最佳扫描 波长。 三（）工作曲线 在5毫升容量瓶中加入 Cu（Ⅱ颍）和 Fe 转／分）上离心5分钟，取上清液1.5m