用传统的ELISA方法检测三聚氰胺melamine.PDFVIP

用传统的 ELISA 方法检测三聚氰胺（melamine ） ERIC A. E. GARBER* Division of Bioanalytical Chemistry, Office of Regulatory Science, Center for Food Safety and Applied Nutrition, U.S. Food and Drug Administration, College Park, Maryland 20740, USA MS 07-548: Received 11 October 2007/Accepted 17 November 2007 摘要 目前发生的多起三聚氰胺（melamine ）掺假的事件，迫切需要快速，有效的检测方法监测 食品中的三聚氰胺。传统的ELISA方法为检测三聚氰胺（melamine ）提供了快速，有效的方 法。本文对几种商品化的ELISA试剂盒检测三聚氰胺中的1，3，5-三嗪进行评估。目前， Abraxis 公司(Abraxis, Warminster, Pa.) 的检测试剂盒可以检测PBS溶液中含量低至 9 ng/ml 的三 聚氰胺（melamine ）和宠物食品中1 ug/ml含量的三聚氰胺。Abraxis公司的阿特拉津atrazine ELISA检测试剂盒则需要含量达0.2 mg/ml 的三聚氰胺才产生高于背景标准偏差四倍的反应。 Strategic Diagnostics公司的EnviroGard Triazine试剂盒对PBS溶液中含量为1.5 mg/ml的 三聚氰胺只产生高于背景标准偏差一倍的反应。使用105 mM 磷酸钠/75 mM 氯化钠/2.5% 脱 脂奶/0.05% 吐温-20 (UD)进行提取使检测灵敏度比制造商推荐的方法提高了五倍. 而Abraxis公 司的三聚氰胺ELISA检测试剂盒, 对使用这两种方法提取宠物食品中污染的三聚氰胺得到相近 的结果。使用UD提取方法可分离出宠物食品中74%± 4%的三聚氰胺。结论: 相对于传统的繁琐 耗时的检测方法，最近上市的Abraxis公司的三聚氰胺ELISA检测试剂盒提供了一种简便实用的 替代检测方法。 自从在宠物食品，饲料和其他含蛋白质原料的如，小麦谷蛋白，水稻浓缩蛋白，玉米麸 等中发现三聚氰胺（melamine ）以来，迫切需要快速的检测方法，从而能准确的检测食品中三 聚氰胺。三聚氰胺常被用于生产塑料、涂料、造纸、防皱纺织品和化肥, 它也被用以制造阻燃 剂。Newton and Utley对将三聚氰胺作为属于非蛋白质含氮化合物添加到饲料中进行了研究。 虽然三聚氰胺能被消化，大多数氮都从尿中排除而不能被胃吸收。世界卫生组织将三聚氰胺列 为不具有健康危险性的化合物。美国国家食品药品监督管理局认可，只要氯仿水溶性提取物不 超过0.5 毫克/平方英寸食物接触面积（21 CFR 177.1460 ），可以使用三聚氰胺甲醛树酯作为塑 料包装表面涂饰。三聚氰胺的三氨基结构对分析方法的建立既有优点也有缺点。通过控制pH值 和离子浓度，可以调节三聚氰胺的色谱特性。另外，在酸性条件下，三聚氰胺有很强的紫外吸 收，使利用检测紫外光吸收的方法成为可能。但是，因为食品中含有复杂的化学组成成分，所 以利用紫外或者酸性条件检测存在很多问题。这些问题可以通过在酸化处理前先从食物中提取 三聚氰胺来解决。Ishiwata等尝试将三聚氰胺转化成热的酸性溶液（极限浓度LOQ，50 ng/ml)并 利用液相色谱进行检测。另外的办法是将C-18液相色谱与电喷质谱连用来增加洗脱谱，包括利 用十三氟庚酸（tridecafluoroheptanoic acid ）来产生离子对。这种离子对检测方法的检测极限和 溶解极限浓度分别为0.01 和 0.1 mg/kg 。还有一种方法是使用C-18液相色谱，用含20%氢氧化铵 的乙腈作为液相检测肉和蛋中三聚氰胺的含量。检测的极限浓度为0.02mg/kg。三甲基硅衍生 法提供了另外一个替代方法来处理这三个氨基基团。这一方法最初是由FDA的法医化学中心建 立的，宠物食品样品先用甲醇提取，然后超声，离心，过滤，干燥。样品用二（三甲基硅）三 氟乙酰胺进行硅烷化，然后使用气相色谱/质谱进行检测，检测的极限浓度为10ug/ml并且恢 复率达到干燥宠物食品的87 ％ 。本文检验了几种商品化的酶联免疫吸附试剂盒，作为一个 有应