激光显微切割技术的发展和应用-中国显微图像网.PDFVIP

激光显微切割技术的发展和应用 武汉大学口腔医学院 卫晋雄综述 赵怡芳审校 摘要 漱先显擞切割技术是将激先和显截镜结合并用于分离蔓杂组织中的单一细胞或细胞群的新手段 。在分子生物 学和病理学等研宽中得到了广泛应用。本文就这一技术的原理和应用现状作一综述。 关■词 漱先显擞切割技术 分子生物学 组织细胞的多样性是细胞分子生物学家分析 算机系统、显微镜、传动杆、塑料盖、醋酸乙烯 比较正常和病变组织的重要障碍。未来医学基因 (ethylenevinylacetate，EVA)薄膜、载玻片、按钮 学发展的重要前提是从细胞的自然生长环境中获 及激光发生器等构成。EVA薄膜粘贴于硬而平的 取纯一细胞群进行分子生物学分析m。为此，美国国 塑料盖子下面。操作时将附有组织切片的载玻片置 立卫生研究院 (NIH)于 1998年开发出了激光显 于显微镜平台上，细胞图像通过显微镜显示于电脑 微切割技术(1asercapturemicrodissection，LCM)。 屏幕。根据图像选好 目的区域，然后由传动臂将透 它使研究者通过简单的操纵杆和按钮即可获得形 明的EVA热塑薄膜精确放置在组织切片的上方。 态完整的单一细胞，使分子生物学、基因等的分析 通过操纵杆对切片的移动使 目的细胞或细胞群位 更加精确特异。 于视区中心。根据 目的区尺寸按动按钮，聚焦红外 线激光束，用激光脉冲熔化 目的细胞群上的薄膜， 1 LCM 的开发背景 熔化的薄膜延展并包绕其下的组织。由于EVA薄 细胞分子生物学的关键是制备用于生物大分 膜的多聚长链能连接并固定细胞，因此多聚薄膜以 子和生化学分析的细胞。在进行复杂的分子杂交 与常规石蜡或塑料相似的方式包埋切割的目的细 等分子生物学研究中，由于非 目的细胞的污染而 胞。激光包埋后，目的组织虽与周围组织相连，但已 严重影响了实验结果。从新鲜组织获得的细胞进 成为5m厚的高机械强度的、结合于纯多聚薄膜 行培养，虽可减少污染，但由于培养环境不同于组 表面的多聚体 ／组织复合物。以这种方式，在显微 织 自然生长状态，培养细胞并不能反映它们原生 镜控制下，多聚膜可结合和获取同一种细胞。激光 的基因表达方式和分子事件田。激光显微切割技术 发射结束，机械臂将盖子和薄膜从切片中移出时， 是为了从多种细胞构成的组织中获得纯一细胞而 组织在多聚物 ／组织复合物边缘折裂，非结合组织 逐渐发展起来的。最初的显微切割术是用手或在 被遗留在载玻片上。盖子 ／薄膜 ／组织复合物可由 显微操作器导引下，用针从薄的组织切片中刮获 移动臂 自动转至含解离缓冲液 的0．5mlEppen- 感兴趣的细胞。Shibata的紫外线负选择法是微切 doff离心管。倒置离心管，EVA薄膜良好的水溶液 技术的第一个重大进步四。然而，这些方法人为因 通路使缓冲液迅速和细胞接触，并将细胞降解成生 素影响大，费时费力而精确度差。1996年底，Em— 物大分子成分。因此，利用此管可直接进行DNA、 mert描述了LCM技术码。其后不久，开始有商业化 RNA和蛋白质等分子生物学研究。如需进行特殊 的LCM仪器销售。LCM克服了前期方法中的不确 结构，如细胞核、染色体等的分析，可用多聚物溶解 定性，得到了迅速运用和推广。目前，在发育生物 液，如=甲苯使薄膜溶解，保持细胞的完整结构而 学、癌