试验14分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素维生素B2.PDF

实验14  分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素 实验14  分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素 实验14  分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素 （维生素B2） （维生素B2） （维生素B2） 复旦化学系 教学实验中心 18:08:34 18:08:34 18:08:34 一、实验目的 二、方法原理 三、FL-4500荧光分光光度计 四、实验步骤 五、数据处理 六、思考题 18:08:34 18:08:34 18:08:34 一、实验目的 1. 掌握面粉样品的消化方法，了解溶液的pH值等对核黄素 荧光强度的影响。 2. 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握其正 确使用方法。 3.掌握荧光分析法基本原理和实验方法。 18:08:34 18:08:34 18:08:34 二、方法原理 1.荧光、荧光分子/荧光物质 2.荧光分析法：特点、定量方法 3.荧光分光光度计：结构、原理、操作 4.核黄素VB2：结构、性质、面粉中提取方法 18:08:34 18:08:34 18:08:34 分子发光的基本原理 分子发光的基本原理 第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家 第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家 N.Monardes ，1575 年他提到在含有一种称为“ Lignum N.Monardes ，1575 年他提到在含有一种称为“ Lignum Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝 Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝 色。 色。 直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光 直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光 度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这 度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这 种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不 种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不 是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概 是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概 念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。 念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。 1867年，Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作， 1867年，Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作， 应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。 应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。 19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由 19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由 Jette和West提出了第一台荧光计。 Jette和West提出了第一台荧光计。 18:08:34 18:08:34 18:08:34 分子发光的类型 分子发光的类型 光致发光 光致发光 化学发光/生物发光 化学发光/生物发光 热致发光 按激发的模式分 热致发光 按激发的模式分 类： 场致发光 类：