生化实验酶作用的一般性质.docVIP

实验3 酶作用的一般性质?5H2O，加100 ml蒸馏水加热溶解，冷却；另将173g柠檬酸钠和100g NaCO3?2H2O，以600ml蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢加到柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000ml。如有沉淀可过滤除去，此试剂可长期保存。 Benedict试剂与Fehling试剂的还原机理是相似的，其主要成分是硫酸铜碳酸钠和柠檬酸钠的水溶液，利用二价铜离子来检验还原性糖。Benedict试剂要比Fehling试剂稳定。其反应方程式为CH2OH（CHOH）4CHO+2Cu(OH)2CH2OH（CHOH）4COOH+Cu2O↓+2H2O 即二价铜离子氧化羰基碳，变成一价氧化亚铜成沉淀，半缩醛基氧化成羧基。 ?12H2O）溶于1000ml水中。 B液：0.l mol／L柠檬酸：称取21.01g柠檬酸（C6H8O7?H2O）溶于1000 ml水中。 pH 5.0缓冲液：A液10.30ml + B液9.70ml pH 7.0缓冲液：A液16.47ml + B液3.53ml pH 8.0缓冲液：A液19.45ml + B液0.55ml 1% CuSO4?5H2O溶液。 1% NaCl溶液。 四、实验内容 （一）、酶作用的专一性 蔗糖酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖，而不能水解淀粉，淀粉酶却能催化淀粉水解而生成麦芽糖而不能水解蔗糖。以上三种还原糖能与纯净的淀粉和蔗糖不呈现红色或黄色。 1、取标有号码的试管4支，按下表加入试试。 2、将各管摇匀后，置于37℃水浴中，保温15min。 3、从各管中取出1ml溶液加到标有相应号码的4支试管内，再加入3ml，于沸水浴中加热2~3min，观察颜色变化并说明之。 序号 2%蔗糖/ml 0.5%淀粉/ml 淀粉酶/ml 蔗糖酶/ml 试剂 颜色反应 1 3 0 1 0 2 3 0 0 1 3 0 3 1 0 4 0 3 0 1 影响酶作用的几种因素 Ⅰ 温度对酶活性的影响 大多数酶的最适温度在3750℃范围内，超过5060℃后往往引起酶活性降低，并随温度再升高而失活，一般酶在100℃煮沸后往往完全失活，酶制剂常在低温保存是因为低温时酶并不失活，只是延缓或停止酶的反应。 淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈。麦芽糖遇碘也不呈颜色。淀粉被淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 1、取已标号的试管3支，按下表加入试剂。 2、将加好试剂的3支试管分别放入不同温度的环境中，经反应5min后，取出加入碘液观察其颜色变化。 序号 淀粉酶液 /ml 0.5%淀粉 /ml 温度 /℃ 保温时间 /min 加碘后呈现的颜色 1 1 3 0 5 2 1 3 37 5 3 1（经煮沸5min） 3 37 5 注：淀粉待其它试剂加好后，再依次加入各管，pH、激动剂及抑制剂实验亦同。Ⅱ pH对酶活性的影响 酶的活性，受环境pH的影响极为显著，每一种酶只能在一定的pH范围内表现其活性，当在某一pH时，酶的活性随之降低。过酸或过碱使酶失去活性，不同酶的最适pH不同，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。 1、取支标号的试管按下表加入试剂，向各管加淀粉酶时间依次隔0.5min。 2、将各管摇匀并依次（即间隔0.5min）置于37℃恒温水浴中，保温1min，从第号试管中取出少量溶液加入碘2滴，若呈蓝色反应，继续保温1min，直到第支试管呈现淡红色或橙黄色，即自1号试管起间隔0.5min依次向各管加碘2滴，比较各试管颜色并解释之。 序号 pH 缓冲液/ml 淀粉酶/ml 0.5%淀粉/ml 加碘后呈现的颜色 1 5.0 2 2 3 2 2 2 3 3 8.0 2 2 3 Ⅲ 激动剂及抑制剂对酶活性的影响 凡能引起酶活性增加的物质称为酶的激动剂凡能引起酶活性降低的物质称为酶的抑制试。例如氯离子为唾液淀粉酶的激动剂，铜离子则为其抑制剂。 1、取3支标号的试管，按下表加入试剂。 2、将各试管摇匀，同时放入37℃的恒温水浴中，保温2min后，取1号试管少量溶液于另外试管中，加入碘2滴，若呈蓝色反应，继续保温1min，直到1号试管呈现淡红色或橙黄色，即向3支试管各加碘2滴，比较各试管的颜色并解释之。 序号 1%NaCl /ml 0.5%CuSO4 /ml H2O /ml 淀粉酶 /ml 0.5%淀粉 /ml 颜色反应 1 1 0 0 1 2 2 0 1 0 1 2 3 0 0 1 1 2