考研生物化学总结版本.docVIP

生物化学 1)为何含氮量能表示蛋白质相对量，计算公式 各种蛋白质含氮量接近，平均为16%，因此据含氮量可计算出蛋白质含量 计算公式：100g样品蛋白质含量=一克样品含氮克数*6.25*100 2)蛋白质基本组成单位，结构特征 基本组成单位：L-α-氨基酸 结构特征：α碳原子连有一个氨基，一个羧基，一个侧链和一个H；不同的侧链表现出不同的性质 3)氨基酸等电点，如何计算 氨基酸具有氨基和羧基均可游离成带正电荷或负电荷的离子，此外有些氨基酸侧链也能解离成带电荷的离子，当氨基酸解离出阳离子和阴离子趋势和程度相等，呈电中性时，溶液PH值称为等电点 计算？ pI=1/2（pK1+pK2），pK1、pK2为α羧基和α氨基解离常数 4)肽键，肽链，蛋白质一级结构 肽键:一个氨基酸的α氨基与另一氨基酸的α羧基缩合脱去1个H2O，形成酰胺键称为肽键 肽链:许多氨基酸通过肽键连接成长链称为肽链 蛋白质一级结构:蛋白质分子中氨基酸的排列顺序 5)蛋白质二级结构，主要有几种，各自结构特征 蛋白质二级结构：肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 Aα-螺旋： ①多肽链主链右手螺旋，即围绕中心轴呈顺时针方向螺旋上升 ②氨基酸残基伸向外侧 ③每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，螺距为0.54nm ④α-螺旋靠上下肽键形成的氢键维系，即每个肽键的N-H与第四个肽键的羰基形成氢键 Bβ折叠： ①多肽链充分伸展，每个肽单位以Cα为旋转点，依次折叠成锯齿状 ②氨基酸残基交替位于锯齿状结构上下方 ③两条以上肽链或一条肽链内若干肽段的锯齿结构互相平行，走向可相同可相反，反向平行肽链间距为0.7nm ④通过肽链之间的羰基氧和亚氨基氢形成氢键维系稳定 Cβ-转角 ①球状蛋白质分子，肽链主链常出现180度回折，称β-转角 ②β-转角常由4个氨基酸残基构成，第一个氨基酸残基羰基氧和第四个氨基酸残基氨基氢形成氢键 ③第二个氨基酸残基通常为脯氨酸 D无规则卷曲:肽链中没有确定规律的结构 6)举例说明蛋白质四级结构 蛋白质分子各个具有三级结构的亚基之间的空间排布及亚基间的相互作用（非共价键）称为四级结构 以血红蛋白为例，4个亚基，2个α亚基，2个β亚基，一个α亚基和1个β亚基组成一个单体，两个单体呈对角排列，四个亚基间有8个非共价键维持其四级结构 7)核糖核酸酶分子4个二硫键断裂后复性，正确配对率高达95%以上，为何？ 多肽链一级结构决定高级机构，其四个二硫键在适当条件下均能正确配对，形成具有活性高级机构 8)蛋白质变性，变性与沉淀关系 蛋白质变性：理化因素作用下，蛋白质空间构象破坏，导致蛋白质理化性质和生物活性改变 变性与沉淀关系： 变性蛋白质容易沉淀，（蛋白质变性后疏水侧链暴露，肽链互相缠绕而聚集，从溶液中析出，即沉淀）；但沉淀蛋白质不一定变性 9)举例说明蛋白质一级结构、空间构象、功能的关系 一级结构是高级结构的基础，一级结构相似，空间构象，功能也相似 例1：肾上腺皮质激素的4-10位氨基酸残基与促黑激素序列相同，ACTH具有较弱的促黑激素作用 例2：人与猕猴的细胞色素C只相差1个氨基酸残基，空间构象，功能相似 10)蛋白质变构效应 ①变构效应：当配体与蛋白质亚基结合，引起亚基空间构象改变，伴随蛋白质生物学功能的变化，称为变构效应。具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白，常具有四级结构。 ②变构也可发生在亚基之间，当一个亚基构象的改变引起相邻亚基的构象和功能的改变③以血红蛋白为例，一份子O2与一个血红素辅基结合，引起亚基构象变化，进而引起相邻亚基构象变化，使更容易与O2结合 别构现象，别构调节（allosteric regulation）：①体内有的代谢物可以与某些酶分子活性中心外的某一部位可逆结合，使酶发生变构并改变其催化活性，这种调节方式称为别够调节。与此相关的酶称为别构酶，引起别构效应的代谢物称为别构效应剂。②通常代谢途径中的第一个酶或处于几条代谢途径交汇点的酶多为别构酶，后续产物堆积可抑制上游别构酶，匮乏可激活别构酶 11)常用蛋白质分离纯化方法，各自作用原理（4析+2） ①盐析：蛋白质溶液加入中性盐破坏蛋白质水化膜，使蛋白质聚集而沉淀 ②透析：利用能透过小分子物质的半透膜，使大小分子蛋白质分离，达到蛋白质浓缩和去除盐类小分子的目的 ③离子交换层析：蛋白质为两性电解质，一定PH值溶液中解离成带有电荷的胶体颗粒，与层析柱内离子交换树脂颗粒表面的相反电荷吸引，用盐液洗脱，带电量小的蛋白质先被洗脱，增加盐液浓度可使带电荷大的蛋白质被洗脱，分部收集洗脱液达到分离蛋白质目的 ④分子筛层析：根据分子大小而分离，层析柱内填充的颗粒带有小孔，小分子蛋白质能进入小孔，大分子不能进入，所以不同分子量的蛋白质在柱内滞留时间不同，流出层析柱先后不同 ⑤超离心：蛋白质为胶体颗粒，