5-3血红蛋白的提取和分离.ppt

2）凝胶色谱柱填料的处理 2）凝胶色谱柱填料的处理 2）凝胶色谱柱填料的处理 计算凝胶量 配置凝胶悬浮液 装填 洗涤平衡 　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意 装配好的凝胶柱 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 低速短时间 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 低速短时间 黄色血浆 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 低速短时间 黄色血浆 暗红色 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 低速短时间 黄色血浆 暗红色 五倍体积 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 低速短时间 黄色血浆 暗红色 五倍体积 生理盐水 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 重复洗涤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数