本科实验免疫组化PPT.ppt

免疫组织化学技术?  Immunohistochemistry  techniques ;第一节 免疫组织化学 技术概述;（一）发展简史 ;2000年以后各种免疫组化技术更加成熟,使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。;定义:免疫组织化学又称为免疫细胞化学（Immunocytochemistry techniques ）,它是组织化学的分支,它是用标记的特异性抗体对组织内抗原的分布进行组织和细胞原位检测技术,因此又被称为原位免疫学（In situ immunology).;荧光素、酶;? 三大系统 本技术是应用免疫学原理来识别待测抗原，再通过酶和底物的作用外加显色剂，将上述反应显示出来。;免疫组 织化学;识别系统是指特异性抗体识别组织或细胞中的靶抗原。抗原抗体的特异性结合是本技术的基本依据。;联结系统由联结抗体构成。它的作用是联接识别系统和显示系统。 ;显示系统的目的是使抗原抗体间的特异性结合变为肉眼可见。因此显示系统由标记酶，底物和显色剂组成，以在靶抗原存在位点上形成有色沉淀。 ;; ①应用于肿瘤分期；(原位癌or浸润癌) ②检测肿瘤相关抗原：应用肿瘤胚胎性抗原诊断某些肿瘤，如癌胚抗原（CEA）对胃肠道癌、甲胎蛋白（AFP）对肝癌和卵巢内胚窦癌诊断有帮助； ③检测肿瘤细胞增生标志物（ki-67, PCNA） ;④ 检测癌基因与抑癌基因产物； ⑤ 预测治疗反应，为肿瘤治疗的选择提供依据，如乳腺癌检测雌、孕激素受体（ER、PR）呈阳性时，应用他莫昔芬（三苯氧胺）治疗可预期获得较好的疗效； ;⑥研究某些癌症与病毒的关系，如肝癌与乙型肝炎病毒、鼻咽癌与EB病毒、宫颈癌与乳头状瘤病毒等的关系； ⑦ 应用于临床病理诊断。; 免疫组化在临床诊断中 应用病例示范（Case 1）;HE染色 ; ; ; ;;免疫组化在临床诊断中 应用病例示范（Case 2）; ; ; ; ; HMB45黑色素瘤诊断的“金标准”.在诊断恶性黑色素瘤中已经有多个抗体联合，犹如“梦之队”， HMB45联合tyrosinase 和 MART1基因产物. 诊断：恶性黑色素瘤。; 1、概念: 抗体（antibody，Ab）是机体受Ag刺激后由B淋巴细胞的衍生物--浆细胞分泌的一类免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig),可与相应抗原特异性结合。 ; 每条Ig单体皆由2条相同的重链和2条相同的轻链构成，链间以二硫键连接。在多肽链的N端因氨基酸序列不同而有2个可变区，它们是结构相同的2个Fab片段，因此一个Ab单体分子有2个Ag结合部位（双价）；在C端氨基酸序列稳定为恒定区，即Fc片段，是第二抗体的结合部位或受体结合部位。; ;3.抗体的分类　　 免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。　　单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。　　多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。;PcAb; PcAb McAb 针对的Ag决定簇 多个 单一 产生Ig的B cell clone 多个 单一 特异性 + +++ 敏感性 +++ ++ 背景染色 + — 交叉反应 + — 价格 较低 较高 各批Ab特异性和 亲和性的可重复性 不一 稳定 ;三.抗体的标记;①能与抗体形成比较牢固的结合；②不影响抗体与抗原的结合；