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猪弓形虫病的诊疗报告 　　摘要：对一例病猪进行了流行病学调查和实验室检查，结合血清学和聚合酶链式反应方法进行病例检测，结果表明，该例病猪是由弓形虫感染引起。 　　关键词：猪；弓形虫病；聚合酶链式反应；诊断 　　中图分类号：Ｓ８５８．２８；Ｓ８５１．３１＋３；Ｓ８５２．７２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11404－0796-04 　　 　　Clinic Report for Diagnoses of Swine Toxoplasmosis 　　 　　ＬＩＵ Ｔａｏ，ＷＡＮＧ Ｒｕｉ，ＱＵ Ｚｈｅ－ｈｕｉ，ＷＥＩ Ａｉ－ｚｈｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｎ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ｏｎｅ ｃａｓｅ ｏｆ ｐｉｇ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ was ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｓｗｉｎｅ Ｔｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｗｉｎｅ； tｏｘｏｐｌａｓｍosis； ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ； ｄｉａｇｎｏｓｉｓ 　　 　　弓形体又叫弓形虫、弓浆虫或毒浆虫，属于一种单细胞原虫，是引发弓形虫病的病原体。病原体寄生在终末宿主猫科动物体内生长繁殖，形成卵囊并随宿主粪便排出体外，发育成熟而具有感染力。具有感染力的卵囊污染食物和水源，被中间宿主食入或饮入后，经淋巴和血液进入组织器官，并侵入有核细胞内，造成组织器官的严重损害和机体免疫力下降，而出现患病体征。据相关统计资料表明，一般猪场猪群感染率在２０％以上，有的高达６０％，死亡率达６０％～８０％。弓形虫病一年四季均可发生，但以每年的４～１０月多发，任何年龄的猪都可感染，而以１０～５０ ｋｇ的中小猪发病较严重。临床上生产母猪常有发病，但配种公猪很少发生，这可能与抵抗力有关［1-3］。高床饲养的猪群少见发病，而平养的猪群则屡见不鲜，可能与猪只接触粪便的程度有关。河南省信阳市平桥区某商品猪场养猪３ ０００多头，２０１０年４～５月期间猪群突然发病，在１个月内陆续死亡５头，２０多头病危，另有１００多头发病。发病和死亡的猪以４０～５０ ｋｇ的中小猪为主。作者主要就这起猪弓形虫病的流行特点、临床症状、诊断方法以及防治处理等方面做如下报告。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１试验动物１头发病死亡的育肥猪；６头活猪，有育肥猪４头、母猪１头和空怀母猪１头，从６头活猪颈静脉随机无菌采集全血，每头约４ ｍＬ，得到血液样品。 　　１．１．２检测试剂Ｔａｑ酶、ＰＣＲ缓冲液、ｄＮＴＰ为大连宝生物公司产品；蛋白酶Ｋ为Ｍｅｒｃｋ公司产品；弓形虫抗原ＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自武汉科前生物技术有限公司；小白鼠购自信阳职业技术学院。染色液有瑞氏染液、ＨＥ染液。 　　１．１．３引物设计根据ＧｅｎＢａｎｋ中已登录的猪弓形体基因序列，利用Ｐｒｉｍｅｒ５．０软件设计一对引物，上游引物Ｐ１为５′－ＣＧＴＧＡＣＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＧＴＣＴＧ－３′；下游引物Ｐ２为５′－ＣＧＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＡＧＴＧＣＡＴＣＴＧＧＡＴ－３′。预计ＰＣＲ扩增产物长度为４６３ｂｐ。 　　１．１．４主要仪器为实验室现有的ＰＣＲ仪、高速冷冻离心机、尼康Ｅ２００显微镜、尼康４５００数码照相机。 　　１．２兽医检查 　　１．２．１涂片对发病死亡的育肥猪进行剖检，剖检时，取病死猪的血液、心包液和腹腔液进行涂片，用瑞氏染色法染色后光学显微镜检查，进行流行病学调查。 　　１．２．２病理学检查按常规方法对发病死亡的育肥猪进行尸体剖检，记录眼观病变情况。 　　１．２．３血清学检测将采集到的４头育肥猪的全血在高速冷冻离心机上５ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心８ ｍｉｎ，分离血清。采用猪弓形虫酶联免疫吸附试验进行检测。 　　１．３ＰＣＲ检测 　　剖解时无菌分别取一块肺脏、肝脏、淋巴结以及脾脏组织，放入无菌塑料袋中，于－７０环境备用。 　　１．３．１ＤＮＡ的提取取病料肺、肝、淋巴结组织研碎，后加１０倍生理盐水接种小白鼠腹腔，每只接种０．５ ｍＬ。待小白鼠出现被毛粗乱、呼吸促迫症状，从其腹水收取弓形虫速殖子，计数后加入ＳＤＳ裂解液和蛋白酶Ｋ，混匀后置于３７消化过夜。消化好的虫体悬浮液再加入５ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ溶液和５％ ＣＴＡＢ溶液，６５水浴１０ ｍｉｎ；苯酚氯仿异戊醇溶液抽提２次，用异丙醇沉淀，７０％乙醇洗涤；适量的灭菌水溶解，－２０保存。 　　１．３．２ＰＣＲ反应ＰＣＲ反应体系为５