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四种蚂蚁酯酶同工酶分析 　　摘要：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对膜翅目蚁科４种蚂蚁的酯酶同工酶进行了比较研究。经比较分析发现４种蚂蚁的酯酶同工酶酶谱带清晰、稳定性好、差异显著，显示出各自的特征酶带，可以用它作为遗传标志反映种群基因结构的变化和种内、种间的亲缘关系。 　　关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳；蚁科；同工酶；酯酶同工酶 　　中图分类号：Ｑ９６９．５５４．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11405－0980-04 　　 　　Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｓｔｅｒａｓｅ Ｉｓｏｚｙｍｅ ｉｎ Ｆｏｕｒ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ａｎｔｓ 　　 　　ＬI Ｓｈｕ－ｐｉｎｇ，ＷU Ｙａｎ－ｌｉ，ＷANG Ｙｕ－ｌｉｎｇ，ＹANG Ｙｏｎｇ－ｘｉａｎ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｓｔｅｒａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｚｙｍｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｅｓｔｅｒａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｉｎ ｆｏｕｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ． Ｔｈｅ ｚｙｍｏｇｒａｍｓ ｗｅｒｅ ｖｅｒｙ ｃｌｅａｒ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｙ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｓ ａ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ； aｎｔｓ； ｉｓｏｚｙｍｅ； ｅｓｔｅｒａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ 　　 　　自从Ｈｕｎｔｅｒ和Ｍａｒｋｅｒｔ创立了同工酶酶谱技术以来，同工酶的研究得到了很大的发展，酶谱的变化已作为鉴定物种、研究分类与进化、遗传与变异的重要指标。同工酶电泳技术具有客观、恒定、精确的优点［１］。酯酶同工酶是目前应用最多的酶类，酯酶是具有多态性的一组同工酶，是生物体内广泛存在的水解酶类，是由染色体上不同的基因或共显性等位基因译制的，是直接的基因产物，在种属鉴定和遗传变异的研究中具有重要作用。研究结果证明，酯酶同工酶谱带丰富清晰，在不同物种间差异明显，可以有效地区分不同物种［２］。 　　同工酶电泳技术已广泛应用于昆虫纲多个类群的分类学研究中。并已证明对同工酶酶谱资料的分析在鉴定种类、确定亲缘关系、区分近缘种、姐妹以及解决类群的分类地位争端方面具有重要意义和应用价值［３］。但目前把同工酶电泳技术应用于膜翅目蚁科进行研究的报道相对较少，徐畅等［４］对此进行了研究，结果表明利用同工酶电泳技术进行蚁科种类的分类研究是可行的；李绍文等［５］研究表明蚁科总科昆虫同其他总科昆虫的酯酶同工酶基因差异显著；Ｈｅｉｎｚ等［６］的研究发现细胸蚁属类群的酯酶同工酶种间表现出一些差异；张家萍［７］研究了切叶蚁亚科与蚁亚科６属８种昆虫的酯酶同工酶酶谱，并进行了聚类分析。本文对切叶蚁亚科和伪切叶蚁亚科的２属４种蚂蚁的酯酶同工酶进行比较研究，旨在从分子水平对膜翅目蚁科物种的分类进行试验探究。 　　１材料和方法 　　１．１材料的种类及来源 　　所用蚂蚁材料为２００７年５月采自河南商丘市郊区。供试材料种类、地点见表１。 　　１．２仪器 　　ＤＹＣ―２４Ｂ型垂直电泳槽；ＤＹＹ―５型稳压稳流电泳仪；ＧＬ―２０Ｇ―ＩＩ高速台式冷冻离心机；５００ μＬ欧林巴斯数码相机；ＦＡ２００４电子天平；微量进样器２０ μＬ、１００ μＬ和１ ０００ μＬ。 　　１．３试验药品及试剂配制 　　Ａ液：丙烯酰胺Ａｃｒ３０ ｇ，双丙烯酰胺Ｂｉｓ０．２ｇ，加水至１００ ｍＬ；Ｂ液：丙烯酰胺Ａｃｒ３０ ｇ，双丙烯酰胺Ｂｉｓ ０．８ ｇ，加水至１００ ｍＬ；Ｃ液：１ ｍｏｌ／Ｌ盐酸４８ｍＬ，Ｔｒｉｓ ３３．６ ｇ，ＴＥＭＥＤ ２３０ μＬ，加水定容到１００ｍＬ，ｐＨ值为８．９；Ｄ液：１ ｍｏｌ／Ｌ盐酸４８ ｍＬ，Ｔｒｉｓ５．９８ｇ，ＴＥＭＥＤ ４６０ μＬ，加水定容到１００ ｍＬ，ｐＨ值为６．８；Ｅ液：过硫酸铵５ｇ加水至５０ ｍＬ；电极缓冲液：Ｔｒｉｓ ６ ｇ，Ｇｌｙ ２８．８ ｇ加水至１ ０００ mＬ；溴酚蓝指示剂：甘油０．８ ｍＬ，ｐＨ值为６．８的Ｄ液1 mＬ，５％的溴酚蓝２滴；研磨液：０．１ ｍｏｌ／Ｌ盐酸８９．４ ｍＬ，Ｔｒｉｓ １．２１１ ４ ｇ，加水至２００ ｍＬ，ｐＨ值为７．２；染液［８］：取醋酸－１－奈酯、醋酸－２－