PCR法制备地高辛标记DNA探针斑点杂交检测副-中国食品卫生杂志.PDF

中国食品卫生杂志 　　　 　　　　　 — 340 — 2009 年第 21 卷第 4 期 CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE 论著 PCR 法制备地高辛标记 DNA 探针斑点杂交检测副溶血性弧菌 tlh 基因 1 1 2 2 曹小红 　朱雪兰 　陈　艳 　刘秀梅 ( 1. 天津科技大学食品营养与安全重点实验室 ,天津 　300457 ; 2 . 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 ,北京 　10002 1) 摘 　要 : 目的　建立检测副溶血性弧菌种特异性 tlh 基因的斑点杂交方法 。方法 　采用 PCR 法制备地高辛标记 DNA 探针 ,建立斑点杂交条件 。杂交反应条件优化如下 :杂交温度65 ℃,杂交时间 9～12 h ,探针使用浓度 100 ～ 125 pgml 。结果 　地高辛标记 tlh 基因探针长度为 450 bp ,标记产量为 50 μ 探针具有较高的灵敏度和特异性 , gml 。 可重复使用 4 次 。结论 　本方法具有快速 、简便 、高效的特点 ,适用于副溶血性弧菌菌株的鉴定 。 关键词 :弧菌 ,副溶血性 ; DNA 探针 ; tlh 基因; 斑点杂交 Detection of the tlh Gene of Vibrio Parahaemolyticus by Dotblot Hybridization CAO Xiaohong , ZHU Xuelan , CHEN Yan , L IU Xiumei ( Tianj in Key Laboratory of Food Nutrition and Safety , Tianj in University of Science and Technology , Tianj in 300457 , China) Abstract: Objective 　To establish a dotblot hybridization method to detect the speciesspecific tlh gene of Vibrio p arahaemoly ticus . Method 　PCR was carried out to prepare the digoxingenin (DIG) labeled DNA probe , and the dotblot technique was established subsequently. The dotblot reaction conditions were optimized as follows : the hybridization was allowed at 65 ℃for 9 to 12 h , and the concentration of prob