西安赫特生物科技有限公司XAHT-000007-2013.PDFVIP

谷氨酸盐测定试剂盒 谷氨酸盐测定试剂盒 + 该试剂盒可用于检测谷氨酰胺和/或谷氨酸，通过谷氨酸的脱氢作用，使NAD 转换为 NADH ，通过分光光度计进行检测。可用于含有谷氨酰胺和/或谷氨酸的液体样本的比色测定。 血清或血浆中的L-谷氨酰胺的分析需要进行预处理。该试剂盒不能检测同分异构体。 谷氨酰胺的测量分两步：谷氨酰胺转化为谷氨酸；谷氨酸将氢脱给α酮戊二酸，伴随着NAD+ + 还原为NADH 。用比色法测定NAD 转换为NADH ，它与谷氨酸的氧化呈比例，可代表样本中 谷氨酰胺转化为谷氨酸。该试剂盒可完成100 次反应。 试剂准备 1. 2mM 谷氨酰胺：将谷氨酰胺溶解于3.4mL 蒸馏水中。 2. 1mM 谷氨酸：将谷氨酸溶解于6.8mL 蒸馏水中。 3. ADP 溶液：将ADP 干粉溶于117µL 蒸馏水中，-20°C 保存。 4. NAD 溶液：将NAD 干粉溶于1.2mL 蒸馏水中，-20°C 保存。 5. 谷氨酰胺酶：在谷氨酰胺酶干粉中加入0.12mL 检测缓冲液，再加入1.08mL 蒸馏水，颠倒混 匀，-20°C 保存。 6. 水合肼溶液：将全部的水合肼(0.6mL)加入11.4mL 水合肼缓冲液中。2~8°C 保存。 使用说明 一 谷氨酰胺的测量 A 谷氨酰胺的测量 1. 标准曲线制备 1) 谷氨酰胺标准品：在微量离心管中，分别取2mM 谷氨酰胺0µL、20µL、40µL、80µL、160µL、 200µL，再分别加入蒸馏水280µL、260µL、240µL、200µL、120µL、80µL 。混匀备用。 2) 参考图1 所示，在96 孔板上标记STD 0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0。每个标准品做3 个复孔。 3) 在标记的各孔中加入20µL 检测缓冲液。 4) 再加入10µL 谷氨酰胺酶溶液。 5) 最后加入70µL 谷氨酰胺标准品。 6) 总体积为100µL，谷氨酰胺标准品的终浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1μM 。 7) 在37°C 下孵育1h。 2. 谷氨酰胺 （不含谷氨酸）样本的测定 样本中如果含有超过2mM 谷氨酰胺，需要稀释至2mM 或以下。反应中所提供的谷氨酰胺酶的 量不足以使大量的谷氨酰胺脱氨基。 1) 参考图1 所示，在96 孔板上标记GLN 。每个样品做3 个复孔。 2) 按照上面制备标准曲线的方法，加入检测缓冲液及谷氨酰胺酶溶液。 3) 分别加入待测样本XµL，蒸馏水(70-X)µL 。 4) 在37°C 下孵育1h。 3. 谷氨酰胺 （含谷氨酸）样本的测定 对于含有谷氨酸的谷氨酰胺样本，需要测定内源性谷氨酸，从测定的谷氨酸中减去内源性谷氨 酸，得到样本的含量。 1 1) 将每个样本做3 复孔，参考图1 所示，在96 孔板上做相应的标记： GLN+GLU ：含谷氨酸的谷氨酰胺； GLU ：内源性的谷氨酸。 2) 按照如下的提示，加入相应的成分： 成分 GLN+GLU GLU 检测缓冲液 20µL 20µL 谷氨酰胺酶溶液 10µL / 待测样本 XµL XµL 蒸馏水 (70-X)µL (80-X)µL 3) 在37°C 下孵育1h。 B 谷氨酸的脱氢作用 1. 参考图1 所示，在另一块96 孔板上标记STD, GLN, GLN+GLU 或GLU 。 2. 按下表加入各成分： STD GLN GLN+GLU GLU 水合肼溶液 100µL 100µL 100µL 100µL NAD 溶液 10µL 10µL 10µL 10µL ADP 溶液