第2节 高效液相色谱仪.ppt

* * 一、高效液相色谱仪 二、检测器 第二节高效液相色谱仪 生产厂家 国外：Waters公司、Agilent公司（原HP）、SHMADZU（岛津）公司、戴安等； 国内：大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。 HPLC仪器 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 一、输液系统 1）贮液瓶： 玻璃或塑料瓶，配有溶剂过滤器，其孔径约2 ?m；耐酸碱腐蚀；无色透明或棕色瓶；位置高于泵体，保持输液静压差；密闭。 溶剂应经过0.45μm滤膜过滤（除去溶剂中的固体杂质）。 输液管路顶端一般连有不锈钢或玻璃制成的专用微孔过滤头 2）脱气 原因： 在系统内逸出气泡，影响泵的工作； 影响检测器的灵敏度、基线稳定性 在梯度淋洗时会造成基线漂移或形成鬼峰 除去氧气的影响：流动相中的氧可能与样品、固定相反应使其降解；与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，提高背景吸收；在荧光检测中，可能会引起荧光淬灭现象；在电化学检测中，氧的影响更大 脱气方法 ①加热回流脱气， ②抽真空脱气 ③超声波振动脱气， ④吹氦脱气 ⑤在线真空脱气机脱气 Agilent 1200 HPLC在线真空脱气机原理示意图 3) 输液泵 主要部件之一，压力：10-35 MPa。 泵：主要是柱塞往复泵式恒流泵 要求压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀。 4) 梯度洗脱装置：等度洗脱、梯度洗脱 梯度洗脱：随时间程序地改变流动相组成（极性、pH或离子强度）。 按多元流动相的加压和混合顺序，分为高压梯度和低压梯度两种。 高压梯度: 利用两个输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后送入色谱柱，混合比由两个泵的流速决定。 低压梯度: 在常压下用比例阀将多种溶剂按比例混合后，用 1 个泵加压输至色谱柱。便宜，易实施多元梯度洗脱，常用。 二、进样系统 1）六通进样阀：进样量准确，重现性好。 装入样品 出口 进样 采样环 泵入溶剂 进色谱柱 2）自动进样装置 三、分离系统 1）保护柱 保护分析柱，挡住来源于样品和进样阀 垫圈的微粒； 与分析柱填料相同，粒径大，易装填； 5 cm长，使用 50-100 次。 2）色谱柱 组成：柱管＋固定相 柱端：隔膜片，阻止固定相逸出或流动相、样品等 带入颗粒杂质 分析柱：内径 2-4.6 mm，柱长10-25 cm 制备柱：内径 20-40 mm，柱长10-30 cm 3）柱温箱 精确控制柱温可以提高 tR 的重现性； 较高的柱温能增加样品在流动相的溶解度，缩短分析时间； 升高柱温能增加柱效、提高 R； 分析高分子化合物或黏度大的样品，高于室温； 分析具有生物活性的生物分子，低于室温； 常用柱温范围：室温－65℃ 4)柱效评价 中国药典（ 2005年版）规定：给出分析状态下色谱柱的最小 n，R，拖尾因子 四、检测系统 对检测器的要求： 灵敏度高 响应快 重现性好 线性范围宽 使用范围广 死体积小 对流动相流量和温度波动不敏感 (一) 紫外检测器（ultraviolet detector , UV） 检测原理和 UV-Vis 方法一样。只是，此时所采用的吸收池为微量吸收池，通常其光程为 2-10 mm，体积约为1~10 ?L。 HPLC分析中，约有 80% 的物质具有紫外吸收。因此该类检测器应用很广。。 在选择测量波长时注意：溶剂必须能让所选择的光透过，即所选波长不能小于溶剂的最低使用波长。 -刘志广- 第五章 色谱分析法 *