稻飞虱肠道细菌多样性分析.docVIP

硕　士学位论文 *** 指导教师 专业名称 农药学 研究方向 杀虫剂毒理抗药性 答辩日期 ANALYSIS OF GUT BACTERIA DIVERSITY FROM RICE PLANTHOPPERS BY Xiangxiang LI A THESIS Submitted to Nanjing Agricultural University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Master Degree of Agriculture Science Supervised by Associate Professor Jianya Su Department of Pesticide Science, College of Plant Protection Nanjing Agricultural University Nanjing , P. R. China June 2010 原 创 性 声 明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 ? 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 必威体育官网网址□不必威体育官网网址□ (请在以上方框内打“√”) 年 月 日 导师（需亲笔）签名： 年 月 日 目 录摘 要 I ABSTRACT i 第一章 文献综述 1 1.昆虫肠道微生物 1 1.1昆虫肠道微生物的研究概况 1 1.2昆虫肠道微生物的多样性 2 1.3昆虫肠道微生物的功能 3 1.3.1昆虫重要营养成分的提供者 4 1.3.2 微生物的解毒作用 5 1.3.3 参与昆虫的生殖调控 6 1.3.4 昆虫肠道微生物与Bt相互关系 6 1.4昆虫肠道微生物的应用 7 2.害虫的共生防治 8 2.1共生防治 symbiont control 的概念 8 2.2共生防治的应用研究进展 9 3.水稻飞虱 10 3.1水稻飞虱发生与危害概况 10 3.2水稻飞虱的防治技术 11 3.2.1化学防治 11 3.2.2 生物防治 12 3.2.3农业防治 13 3.3稻飞虱共生菌或肠道微生物的研究进展 13 4.本研究目的意义 14 第二章 材料与方法 17 1.供试昆虫 17 2.飞虱肠道解剖 17 3.肠道细菌的分离与培养 17 3.1平板的制备 17 3.2匀浆与涂板 18 4. 16S rRNA文库构建 18 4.1肠道细菌DNA提取 18 4.2 16S rRNA基因片段的分析 19 5.基因克隆 20 5.1连接 20 5.2 转化与涂板 20 5.3 PCR检测阳性克隆 20 6. RFLP分析 21 7.非培养细菌的感染率的PCR分析 22 7.1检测引物设计 22 7.2制备样品 22 7.3 PCR扩增与电泳 22 8.细菌分离物的生化指标分析 23 8.1革兰氏反应 23 8.2过氧化氢酶反应 23 8.3 V-P试验（测定细菌发酵葡萄糖的变化） 23 8.4淀粉水解 24 8.5硝酸还原特性 24 8.6吲哚产生特性 25 8.7明胶液化特性、H2S产生特性 25 9. BLAST分析与系统发育分析 25 10.杀虫剂降解菌的驯化 26 10.1 培养基制备 26 10.2 细菌驯化培养 26 第三章 结果与分析 27 1.飞虱肠道非培养菌的种类 27 1.1非培养菌的16S rRNA鉴定 27 1.2非培养菌的系统发育分析 33 1.3非培养菌在飞虱种群中的发生率 39 2.飞虱可培养菌的种类与鉴定 42 3.杀虫剂降解菌的驯化及分析 46 第四章 讨论 49 1.飞虱肠道细菌的多样性 49 2. 飞虱肠道优势共生菌的功能 51 3.杀虫剂降解菌 52 4.对稻飞虱进行共生防治的可行性分析 53 第五章 主要结论 55 参考文献 57 致 谢 67 攻读学位期间发表的论文 69 稻飞虱肠道细菌多样性分析 摘 要 本研