采用ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素分析.docVIP

精品论文 参考文献 采用ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素分析 杨继慧 　　湖南省怀化市疾病预防控制中心 418000 　　摘要：目的 分析ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素，寻求提高ELISA方法检测HCV抗体准确性的科学方法。方法 以2013年1月-2014年12月在本院进行丙型肝炎抗体检测的2568份标本作为研究对象，先采用ELISA法测定HCV抗体，对于检测阳性的标本进行HCV-RNA确证试验，对患者基本情况、使用试剂、标本状况、操作过程等影响检测结果的相关因素进行统计分析。结果 ELISA法共计检测出HCV抗体阳性样品78份，阳性率3.04%，HCV-RNA确证试验检测阳性标本数为64份，确证符合率82.05%，在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，包括病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。结论 要提高ELISA法检测HCV抗体的准确度，必须制定严格的标准操作程序并按照标准操作程序进行操作，每次检测都要加入外部质控品，绘制质量控制图。 　　关键词：HCV抗体；ELISA法；影响因素分析 　　酶联免疫吸附试验（ELISA）作为检测丙型肝炎抗体（HCV）最为常用的一种方法，具有特异性强、灵敏度高、操作方便，血清或者血浆样品都可以检测，操作性非常好[1]，不管是批量样品还是单个样品，都可以用该方法进行检测。本文对ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素进行分析，希望能够找到提高检测结果准确性的有效方法。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 以2013年1月-2014年12月在本院进行丙型肝炎抗体检测的2568份标本作为研究对象。 　　1.2仪器设备 酶标仪MK3；洗板机MK2。 　　1.3试剂厂家 ELISA法检测试剂由北京万泰生物药业股份有限公司生产，有效期内使用。HCV-RNA检测试剂采用进口的罗氏公司生产，有效期内使用。 　　1.4方法 先采用ELISA法测定HCV抗体，对于检测阳性的标本进行HCV-RNA确证试验。 　　2 结 果 　　ELISA法共计检测出HCV抗体阳性样品78份，阳性率3.04%，HCV-RNA确证试验检测阳性标本数为64份，确证符合率82.05%。 　　3 讨 论 　　在采用ELISA方法检测HCV抗体的整个过程中，病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。现分别就以上影响因素进行分析讨论： 　　3.1病人基本情况 病人体内的一些内源性物质是影响ELISA法检测HCV抗体的重要因素，这些物质主要有内风湿因子、自身抗体、相关补体、以及一些交叉反应物质等，这些物质与酶标孔特异性结合，可能出现假阳性结果[2]。所以在检测中出现初筛阳性的时候，需要结合患者的整体情况来综合判断，从而提高检测结果的准确性。 　　3.2标本的采集、保存 ELISA方法检测HCV抗体一般都是采用血清样品进行检测，所以在分离血清的时候要充分离心，避免红细胞、纤维蛋白等混入检测样品中。 标本要尽量避免溶血，因为溶血标本容易出现假阳性结果，但是有研究认为只要样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L则不会影响结果[3]。如果在实际检测中遇到溶血标本，可以先检测其溶血血红蛋白，看是否大于4.95g/L，从而确定标本是否适合采用ELISA法进行检测。徐学新等[4]的研究发现不同程度的乳糜血液放置时间越长OD 值下降越多，越容易导致漏检。黄疸病人如果结合胆红素浓度过高也会影响ELISA检测结果，对于高黄疸病人可选择其他检测方法。另外血清样本须避免反复冻融，反复冻融的标本会产生假阴性结果。 　　3.3试剂影响因素 所使用的试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批批检合格，临床评估良好并且在有效期内使用。现在多数实验室正在使用的第3代双抗原夹心法试剂盒，具有良好的敏感性和特异性[5]，在使用过程中酶标结合物要避免反复冻融，以免酶的活性降低。检测试剂盒一般保存在2-8℃冰箱，使用前需要放置室温30min，不同厂家、不同批号的试剂不能混用。 　　3.4加样操作的影响 ELISA检测加样时吸头不能接触到包被物，尽量垂直加入酶标孔的底部，防止标本飞溅出或者产生气泡。加不同样品时需要更换吸头，避免样品间的交叉污染。滴加酶标结合物、显色液、终止液的时候，需要摇匀以后再加。如果样品量大，为了快速加入，可以使用排枪。 　　3.5孵育的影响 孵育是非常重要的一步，是影响结果的决定性因素，必须严格按照说明书要求的孵育时间及温度进行操作，并注意封闭避免边缘效应。在样品量大的时候，酶标板之间不能互相叠加；干热孵育一般会导致受热不均