调神通络针法对缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达影响.docVIP

精品论文 参考文献 调神通络针法对缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达影响 冯卢鹏1 郭家奎2 　　（1天津中医药大学 天津 300073） 　　（2天津中医药大学第二附属医院 天津 300150） 　　【摘要】 目的：调神通络针法对缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达情况的影响。方法：以大脑中动脉缺血再灌注大鼠为研究对象，以调神通络针法为干预，运用免疫组化法观察mGluR5蛋白表达情况。结果：在脑缺血再灌注过程中激活的mGluR5在海马神经元中表达。模型组mGluR5的表达与正常组、假手术组相比较差异明显，提示脑缺血损伤过程中脑组织mGluR5的表达上升。针刺可对激活的mGluR5的表达产生下调影响，说明调神通络针法对缺血性脑损伤起到调节保护作用。结论：调神通络针法对各时间点mGluR5 蛋白表达都有显著降低作用，可对激活的mGluR5的表达产生下调影响，在脑保护方向发展发挥关键作用。 　　【???键词】 mGluR5；调神通络针法；脑缺血再灌注；脑保护 　　【中图分类号】R245 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）16-0363-03 　　代谢型谷氨酸受体5（Metabotropic glutamate receptor 5，mGluR5) 是1992年国外研究者由mGluR1做探针从鼠脑的cDNA文库中首次分离。谷氨酸可以激活代谢型受体发挥效应。mGluR5参与了中枢神经系统的许多病理生理过程，所介导的兴奋性毒性作用是缺血损伤的机制之一。mGluR5参与到磷酸肌醇的水解，由此可能增加了包括 Ca2+内流和蛋白激酶 C激活等破坏事件的发生[1]。mGluR5在海马CA1区有丰富表达，提示mGluR5可能是CA1区传递谷氨酸兴奋活动的受体[2]。Coutinho等报道mGluR5在纹状体、海马及大脑皮质分布丰富[3]。 　　研究旨在通过检测脑缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达情况，了解mGluR5蛋白表达在脑缺血再灌注不同时间点的动态变化规律，来探讨调神通络针法在缺血性脑损伤时的调节保护作用。 　　1.材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　根据SPSS15.0生成的随机表，将健康雄性Wistar大鼠(Ⅱ级)随机分为正常组，假手术组，模型组，非穴位针刺组及调神通络组。模型组及两个针刺组各分4个亚组：缺血再灌注30min（I/R-30min）、缺血再灌注60min（I/R-60min）、缺血再灌注180min（I/R-180min）、缺血再灌注360min（I/R-360min）。每组10只大鼠。 　　1.2 缺血再灌注模型制备 　　参照Longa[4]线栓法并加以改进制备大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，1h后拔出栓线。假手术组除栓线不插入颈内动脉外，其余处理同缺血组；正常组不予任何处理。 　　1.3 动物评分筛选 　　按Zausinger 6分法对其神经功能进行评分[5]，去除评分为0分及4分和5分的动物。评定法：0分不能自发行走。1分自由走动状态下向病变对侧旋转。2分抓住鼠尾，大鼠向病变对侧旋转。3分对于施向病变对侧的侧压力抵抗力下降者。4分不能伸直病变对侧前爪。5分无神经功能缺损。 　　1.4 穴位选择及针刺方法 　　大鼠穴位参照华兴邦《大鼠穴位图谱的研制》[6]选取。采用调神通络针法，选取穴位：顶中线（MS5，百会向至前顶）、顶旁线（MS9，承灵与正营连线）。造模后，将大鼠固定于实验台，用直径0.25 mm，长25 mm的毫针沿皮刺入大鼠的“顶中线”、“顶旁线”。连接电针治疗仪（KWD-8082 长城牌），频率为2/15 Hz的疏密波，电流强度1mA，以肢体轻微抖动的强度为宜，持续10min。非穴位针刺组选取患侧肋下髂嵴上10mm的固定点针刺。正常组和模型组不作处理。 　　1.5 标本处理 　　大鼠达到各时间点后断头取脑，选取损伤侧海马部位。采取免疫组化法观察mGluR5蛋白表达。 　　2.结果 　　 ①正常组 　　 　　 　　 　　正常组、假手术组：显示所有的神经元均着色，染色较深呈灰褐色。 　　模型组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的表达染色逐渐加深，180min，360min两组间差别不明显。 　　调神通络组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的表达染色强度逐渐减弱，着色细胞数也逐渐减少。 　　非穴位针刺组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的