生防菌株ZA1的GFP基因标记及其功能稳定性测定-植物保护学报.PDFVIP

植物保护学报Journal of Plant Protection ，2017 ，44 （4 ）：657-663 DOI ：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2017.2015226 生防菌株ZA1 的GFP 基因标记及其功能稳定性测定 1 1* 1 1 1 2 王 颖 杨成德 薛 莉 张振粉 冯中红 张俊莲 （1. 甘肃农业大学植物保护学院，甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室，兰州730070 ； 2. 甘肃农业大学，甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室，兰州730070 ） 摘要：为明确生防莫海威芽胞杆菌Bacillus mojavensis 菌株ZA 1在作物体内定殖与作物和病原物 的作用机理，运用电击转化法将绿色荧光蛋白表达载体pGFP78 导入菌株ZA 1体内，并采用细菌培 养法、继代培养法和平板抑制法检测其功能稳定性。结果表明，质粒pGFP78 成功导入菌株ZA 1， 标记后菌株ZA 1-gfp 经形态学和分子生物学验证均证明菌株ZA 1 已成功标记，标记菌株ZA 1-gfp 与菌株ZA 1 形态一致，在荧光显微镜下呈现明亮的绿色，并且能够提取导入质粒pGFP78 ，扩展出 质粒所携带的启动子78 序列。功能稳定性鉴定结果表明，标记菌株ZA 1-gfp 遗传稳定性达100%； 与菌株ZA 1 的生长速率差异不显著，且不影响菌株的运动性；菌株ZA 1对马铃薯枯萎病菌、马铃薯 炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌的抑制率分别为64.50%、68.35%和66.55%，标记菌株ZA 1-gfp 对3 种病 原真菌的抑制率分别为67.46%、76.56%和66.75%，表明外源质粒的导入，不影响菌株的抑菌能力。 关键词：莫海威芽胞杆菌；GFP基因；标记；稳定性 Bacillus mojavensis ZA1 labeling with GFP and its functional stability Wang Ying1 Yang Chengde1* Xue Li1 Zhang Zhenfen1 Feng Zhonghong1 Zhang Junlian2 （1. Biocontrol Engineering Laboratory of Crop Diseases and Pests of Gansu Province, College of Plant Protection, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu Province, China; 2. Gansu Key Laboratory of Crop Improvement ＆Germplasm Enhancement ，Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu Province, China） Abstract: In order to confirm the interactions between Bacillus mojavensis strain ZA1 with plant-host and pathogens after strain ZA1 was transformed into plant, and the vector of pGFP78 was transformed into biocontrol strain ZA 1 by electroporation, and the germiculture, subculture and dual-culture tech- nique were used to test the functional stability of strain ZA 1. The results showed that pGFP78 has trans-