应用体外DNA同源重组技术构建pcDNANGF-杂志社-江苏大学.PDFVIP

21 5 ( ) Vol． 21 No． 5 第 卷第 期 江苏大学学报 医学版 2011 9 Journal of Jiangsu University (Medicine Edition) Sept． 2011 年 月 应用体外DNA 同源重组技术构建pcDNA3． 1-NGF 和pcDNA3． 1-TrkA ， ， ， ， 张严 龚爱华 金洁 邵根宝 彭琬昕 ( ， 2120 13) 江苏大学基础医学与医学技术学院 江苏镇江 ［ ］ : DNA (NGF) (TrkA) 摘 要 目的 利用体外 同源重组的方法分别构建含神经生长因子 和神经生长因子受体 基因 。 : 5 ，PCR NGF 的真核表达载体 方法 在引物 加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列 扩增目的基因 和 TrkA ， T4 DNA DNA ， 37 ℃ 线性载体片段和目的基因片段经 聚合酶的外切产生互补的单链 然后 退火实现体外同源重 ， ; 293A ， 。 : pcDNA3． 组 转化并鉴定 将重组质粒转染 细胞 免疫印迹鉴定目的基因的表达情况 结果 成功构建真核载体 1-NGF pcDNA3． 1-TrkA ， 31 × 103 140 × 103 。 : 和 转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是 和 结论 与常规重组技术 ， DNA DNA ， 。 相比 体外 同源重组技术是一种高效的 重组方法 且不需考虑目的片段的限制性酶切位点 ［ ］ DNA ;TrkA ; ;T4 DNA 关键词 体外 同源重组 神经生长因子 聚合酶 ［ ］ R393 ［ ］ A ［ ］ 167 1 － 7783 (2011)05 － 0390 － 04 中图分类号 文献标志码 文章编号 Application of homologous recombination in vitr