牛冷冻精子活力检测方法.pptVIP

活力的检查 牛冻精精子活力检测方法的建立 学生姓名：李梦婷 指导教师：张贵学 教授 合作指导教师：许红喜 助理研究员 所在院系：动物科学技术学院 所学专业：动物科学 研究方向：动物繁殖 立题依据 1 研究现状 2 材料与方法 3 数据分析与结论 4 致谢 5 论文的结构和主要内容 立题依据及研究现状 精液品质的好坏，直接影响到母牛的受胎率，从而影响畜牧业生产的经济效益。因此，在采集的鲜精液的处理和冻精制作过程中，必须对冷冻后的精液品质进行全面检查和鉴定。国家规定每计量冷冻精液解冻后，精子活力至少要大于35%，前进运动精子数至少大于800万个，精子畸形率要小于18%，细菌数小于800个，这样的细管冻精才能用于母畜的繁殖生产和科学研究。对于解冻后的冷冻精液保存一段时间后，用前一定要进行品质检测。本文做了两方面的实验研究：对解冻后的精液密度、活力、细菌数检测的实验研究，建立了完整的检测方法。检测了12头种公牛的原精，2头不符合标准而废弃。设计了37℃及冰水两种环境对解冻后的冷冻精液进行保存,检查菌落数及精子活力,以观察两种保存环境对精液品质的不同影响,为生产提供可应用的操作方法。由结果可以看出,精液保存在冰水或 37℃的环境中,菌落数没有明显的变化,均在国标范围内(菌落数低于800个)，所以时间及时间与温度互作对精液品质没有明显的影响,但温度对精液品质具有显著的影响。 材料与方法 实验材料： 细管冷冻精液来自博瑞遗传有限公司生产基地。每头牛取0.25mL细管冻精14支,要求是同一批次生产的冻精,共12头牛的精液。 显微镜、载玻片、蒸馏水、姬姆萨染料、甲醛、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、甲醇、甘油、血球计数室、3.0%氯化钠溶液 实验方法： 先取两支冷冻细管检查精子活力、畸形率、密度和菌落数,用合格的精液进行后续试验。 12支细管冻精分成两组,每组6支,一组检查活力,一组做细菌培养以检查菌落数。 精子的畸形率 精子活力及密度 冷冻精液检查培养的菌落 项目 细管壁与两端封口 剂量（ml） 精子活力 呈直线运动的精子数 37℃保存4h的活力（%） 顶体完整率（%） 畸形率（%） 细菌菌落数（个） 国家标准GB4143-84 无裂痕、严密 0.25±0.01 ≥35 ≥1×107 ≥5 ≥40.0 ≤18.0 ＜500 第1头 符合标准 0.25 37 1.23×107 5 47.3 15.2 25 第2头 符合标准 0.25 35 1.23×108 5 47.2 12.5 24 第3头 符合标准 0.25 36 1.43×107 5 47.7 16.1 40 第4头 符合标准 0.25 35 1.45×117 5 47.1 12.8 34 第5头 符合标准 0.25 36 1.43×117 5.2 48.5 13.5 33 第6头 符合标准 0.25 38 1.35×117 5.2 50.3 12.7 24 第7头 符合标准 0.25 37 1.38×117 5.1 46.3 13.2 24 第8头 符合标准 0.25 35 1.23×117 5 44.3 15.5 26 第9头 符合标准 0.25 36 1.28×117 5 48.5 14.3 27 第10头 符合标准 0.25 35 1.26×117 5 47.3 15.5 27 第11头 符合标准 0.25 30 1.33×106 3 37.2 22.5 60 第12头 符合标准 0.25 28 1.21×116 2 32.3 31.5 80 牛冻精品质检查结果 由结果可以看出：第11和第12头牛的冷冻精液不符合标准而废弃， 所以只用十只牛的冷冻精液做后面的实验。 活力检查： 6支冻精全部解冻,分成两组,一组置37℃恒温箱中,另一组置于冰水混合物中。开始计时,分别于0.5h、2h、4h后检查精液活力。 细菌培养： 采取倒计时的方法解冻,4h、2h、0.5h分别解冻2支细管, 1支置于37℃恒温箱中,另一支置于冰水混合物。精液分别接种于培养皿中,在37℃恒温箱中培养48h,统计菌落数。 置于冰水混合物中解冻0.5小时后的精子活力 置于冰水混合物中解冻4小时后的精子活力 细菌的培养 置于冰水混合物中解冻0.5小时培养的菌落数 置于恒温箱中解冻0.5小时培养的菌落数 不同保存温度和时间精子活力和菌落数的变化 　牛序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0h 　 活力 0.57 0.55 0.56 0.55 0.56 0.58 0.57 0.55 0.55 0.55 菌落 2 3 1 3 1 2 3 1 1 2 0.5h 冰水 菌落 5 5 6 5 5 7 5 5 5 5 活力 0.57 0.55 0.56 0.55 0.56 0.57 0.57 0.55 0.55 0.5