细胞生物学实验讲义(新).docVIP

细胞生物学实验讲义 吴锦程 梁 杰 编 莆田学院环境与生命科学系生物技术专业 2009年2月 目 录 2. 实验一 普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用...... 4 3. 实验二 4. 实验 细胞膜的渗透性.................................................. .23 5. 实验 细胞凝集反应...................................................... .27 6. 实验 叶绿体的分离与观察7. 实验六 线粒体与液泡的超活染色与观察....................... 32 8. 实验七 酸性磷酸酶的显示方法 (选做）....................... .36 9. 实验 植物细胞原生质流动及其影响因素 (选做）.... 39 10. 实验九 植物细胞骨架的观察 (选做）............................ 41 前 言 细胞生物学是当前生命科学中核心学科之一，也是重要的专业基础课，其理论与实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达与克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物机理等领域，随着分子生物学的研究渗入，分子细胞生物学也得到了突飞猛进的发展。目前许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物学作为本科生和研究生的必修课或基础理论课，同时也开设了专门的细胞生物学实验课，学生们通过实验，进一步地加深了对理论课的理解，也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了基础。本讲义精心选择了细胞生物学中的常规实验，作为教材面向本系生物技术专业本科生进行讲授。 实验一 普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用 一、实验目的 1. 强化普通光镜结构和使用技能的知识，掌握让其发挥最佳效能的方法。 2. 了解暗场显微镜的构造和原理，并掌握它们使用方法。 二、实验用品 1. 材料与标本：载玻片、盖玻片、牙签，香柏油、生物永久装片、镜纸。 2. 器材：光学显微镜，。 实验内容和方法 普通光学显微镜 显微镜 普通光学显微镜的基本工作原理是利用物镜和目镜的多组凸透镜将物 像逐级放大并反射到视网膜上的过程。而显微镜的性能和质量的高低可通过 分辨率、数值孔径、总放大倍率等指标来反映。 (1) 分辨率：衡量光学系统分辨相隔微小距离的两个点能力的指标，即“能 够分辨两点之间最小距离的能力”，称之为光学系统的分辨率。一个光 学系统它所能分辨的两点之间的距离愈小，分辨率也就越高。显微镜的 分辨率用公式表示为：d=0.61λ/NA 式中d为最小分辨距离；λ为光线 的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值 与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则 d值越小，分辨率就越高。 要提高分辨率，即减小d值，可采取以下 措施:① 降低波长λ值,使用短波长光源。② 提高NA值。 ③ 消色差④ 增加明暗反差3) 放大率：放大率就是放大倍数，是指被检验物体经物镜放大再经目镜放 大后，人眼所看到的最终图像的大小对原物体大小的比值，是物镜和目 镜放大倍数的乘积，即：显微镜的总放大倍率=单个物镜的放大倍率× 目镜的放大倍率。放大率也是显微镜的重要参数，但也不能盲目相信放 大率越高越好，在选择时应首先考虑物镜的数值孔径。 (4) 焦深：焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物 体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下 一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。焦深大, 可 以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层，焦 深与其它技术参数有以下关系：① 焦深与总放大倍数及物镜的数值孔 镜成反比② 焦深大，分辨率降低由于低倍物镜的景深较大，所以 在低倍物镜照相时造成困难。 ① 视场直径与视场数 成正比；② 增大物镜的倍数，则视场直径减小。因此，若在低倍镜下 可以看到被检物体的全貌，而换成高倍物镜，就只能看到被检物体的很 小一部份。 (6) 覆盖差：显微镜的