禽流感流行病抗体检测HI试验方法 的诊断与预防.docVIP

精品论文 参考文献 禽流感流行病抗体检测HI试验方法 的诊断与预防 侯俊杰1 张长山2 　　（1黑龙江省七台河市新兴区红旗镇卫生院 154600；2黑龙江勃利县疾病预防控制中心 154500） 　　 　　【摘要】禽流感是由A型流感病毒引起的禽类一种从呼吸系统到全身败血症等多种症状的传染病。此后,这种疫病更名为禽流感。高致病性禽流感发病率、死亡率高,感染的鸡群常常“全军覆没”;低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状,食量减少,产蛋量下降,出现零星死亡;非致病性禽流感不会引起明显的症状,仅使传染的禽类体内产生病毒抗体。 　　【关键词】禽流感 流行病 诊断 　　【中图分类号】R511.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）49-0078-02 　　1 流行病学 　　一般禽流感的病毒都会有很多的病种、水禽和野生的鸟类都是能够可以让禽流感传播的病菌。家里面养的鸡和火鸡都是很容易传播病菌的，然后就是雏鸡和孔雀，鸭、鹅和鸽这样写动物都是病菌传播的比较少的。传染源为多种带毒动物或患病动物,最重要是水禽,如鸭、鹅。 　　2 临床症状 　　2.1临床表现 我们常常以呼吸道和消化道症状为主。排黄绿色粪便、产蛋下降、神经症状、角弓反张肿头、冠和肉髯紫黑色血斑、跖部鳞片出血、饮水量减少。分为3种即急性型、呼吸道型、野禽的隐性型感染。 　　2.2病理变化 高致的病变一般就是坏死，主要的就是消化器官为主；有的病性直接就会破坏泌尿生殖道，不是致病的病情就会不影响病理的变化。 　　2.3诊断方法及程序 　　2.3.1 流行病学 禽流感病毒的宿主广泛,鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑和雉鸡等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。 一般鸡和火鸡都是对病毒禽流感最严重危害的，然而鸭子体内的病毒就比其他的禽类多很多。 　　2.3.2 临床症状 禽流感的潜伏期一般都是从几个小时到3d都是不一定的，有的时候时间的长短都是看感染病毒的毒力和剂量、感染的一些途径、还有就是感染禽的种别和禽体得一些状态。 　　3 稀释液的配制 　　一定使用PH7.2的PBS液，摄氏121度灭菌15分钟，冷却后，摄氏4度恒温保存备用。灭菌的时间和温度及恒温保存是关键要素，不能随意改变。也可先配制浓缩的PBS液保存，每次使用时稀释。PBS对酸碱物质具有一定的缓冲能力，维持反应液的ph值，因此谨慎使用生理盐水。多用PBS液。 　　4 红细胞悬液的制备 　　有的鸡红细胞有自凝现象，所以，一般要采用非免疫的3只以上成年的健康公鸡的血，这样可以减少自凝现象的干扰。采血时，每毫升血液加入抗凝液（3.8%灭菌柠檬酸钠）0.2毫升，将血液注入离心管中，经过3000r/min离心分离5分钟，用吸管吸去上清夜和红细胞上层的血细胞薄膜，将沉淀的红细胞用PBS液洗涤，如此反复洗涤两次，第三次离心10分钟后弃上清液，加PBS液配制0.5-1%红细胞悬液。根据我多年的实践经验，认为0.8%浓度比较合适。当浓度大于0.8%时，沉降的血点过大；浓度小于0.8%时，沉降的血点太小，不易判断，而且沉降速度慢。浓度过高或过低都会影响HI效价的准确性。 　　5 单位抗原的配制 　　（1）取一个96微孔板，在一横排的前个10孔中，在每一孔中加入50微升PBS液，吸取50微升病毒加入第一孔中，混匀后转移到第2孔，混匀后转移到第3孔，依次向后倍比稀释，从第10孔中吸出50微升液体弃去，用第11孔和第12孔作对照。 　　（2）在每一孔中加入50微升红细胞悬液。 　　（3）摇匀，放入37度恒温箱中，20分钟后观察结果 ，倾斜45度，不拉线完全凝集，完全凝集的最后一孔为最大的血凝效价，若血凝效价为1:128，则4单位抗原效价为1:32。 　　使用前对抗原作血凝（HA）试验，测抗原效价，以病毒与红细胞完全凝集的孔作为抗原效价。配好后还要作抗原回滴试验，以检测配制HAU是否准确。若2HAU、1HAU完全凝集，1/2HAU完全抑制，则4单位抗原配制准确。 　　6 待检血清的要求与处理 　　待检血清要新鲜、不腐败、无溶血、无杂质、呈透明状态，盛放血清的容器一定要非常洁净。有的血清含有非特异性凝集抑制因子，一般采用红细胞吸附试验，要除去这些物资，操作方法为：1、将50微升待检血清与100微升PBS液和50微升10%红细胞充分混合；2、置于室温30分钟，每10分钟摇振一次，取上清液用于HI试验。 　　7 稀释时的混合程度 　　稀释血清时，一定要混合均匀，否则会使结果出现较大差异。用微量移液器吹打时，滴头尖端接触V型孔的底部时，V型孔内不能产生气泡，稀释要充分，否则影响