实验一 小肠平滑肌生理特性的观察与分.docVIP

实验一 小肠平滑肌生理特性的观察与分 讨论 一、 实验目的 1. 学习哺乳动物离体肠标本制备及灌流方法。 2. 观察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对舒缩活动的影响。 二、实验原理 消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧张性收缩，对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。 实验材料 1、实验动物：家兔 2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器(量程为25g以下)、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/L NaOH溶液、lmol/L HCl溶液、2%CaCl2溶液。 实验方法和步骤 1、标本制备流程 2、仪器安装及调试 3、观察项目现象及解释 1、标本制备流程： ①击昏家兔→②剖开腹腔快速取出肠管→③制作离体肠标本 ①击昏家兔： 用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。 ②剖开腹腔快速取出肠管： 立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长20~30cm的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠内容物基本洗净。 ③制作离体肠标本： 将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各系一条线，保存于供氧的38℃左右的台氏液中 2、仪器安装与调试 实验安装（如图）：恒温水浴锅控制加热，恒温工作点定在38℃。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上，另一端与张力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。 仪器调试：BL-410系统的使用，选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数t→DC，高频滤波F→30Hz，显速→4.00s/div，增益→100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始”按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单击记录按钮。 观察项目现象及解释 1．待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。 2．乙酰胆碱的作用 用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，由此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。 3．肾上腺素的作用 按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽内1~2滴，观察小肠运动的反应。当效果明显后，立即更换台氏液。 4．氯化钙的作用 加2%CaC12溶液2~3滴入灌流浴槽内，观察其反应，效果明显后迅速冲洗。5．盐酸的作用 加1~2滴1mol/L HCl溶液入浴槽内，观察其反应。 6．氢氧化钠的作用 在(5)基础上加等容量的1mol/L NaOH溶液入浴槽内，观察其反应。按上述方法更换台氏液，反复冲洗。 7．温度的影响 将浴槽内台氏液放出，注入25℃台氏液，观察平滑肌收缩有何改变，当效应明显后再换入38℃台氏液，持续一段时间后，再换入42℃台氏液，观察收缩活动的变化（亦可根据室温的具体情况选做其中的一项）。 五、注意事项 1. 实验过程中必须保证标本的供氧(通气)及浴槽内台氏液的恒温(38℃)，以维持标本活性。 2. 灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。 3. 放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。 4. 上述各药液加入的量系参考数据，效果不明显者可以添加。 5. 每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应。 6．各项处理必须有处理标记。 相关知识 家兔小肠平滑肌以胃幽门与十二指肠交界处的肠管活动最好，对生物化学因素也较敏感，所以选取用此处肠管作标本。 作业 1．从记录曲线中观察比较小肠平滑肌与心肌、骨骼肌的收缩特性有何不同?说明其原理。 2．通过观察分析记录曲线变化，阐明各项处理引起的收缩频率、收缩强度和张力变化的机理。 3．结合本章的实验内容，谈谈观察与思维在实验研究中作用与体会。 实验讨论： 1、正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规则。小肠平滑肌自律性产生的离子基础尚未完全清楚，目前认为，它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关，当钠泵的活动暂时受抑制时，膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时，膜的极化加强，膜电位便