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基因表达转录分析中内参基因的选择精选
薹鎏ii。 jjiii||鎏i鎏i』; i誉i鋈ili篓i蠡誊ii藩篓iiii鎏}}鎏ljlii薹};i;i;i{|鎏ii、蠹i;;薹ji萎萋萋誊蓥ii誊!ij;||;I?:譬j攀j|:|薹I:|?i¨¨¨|+:。囊I:l PI I];:3嚣藉‰一s www.pibb.ac.cn 基因表达转录分析中内参基因的选择术 张艳君1,2’ 朱志峰1’ 陆 融·,∞徐琼,) 石琳熙1’ 简 序1’ 刘俊燕1)姚智1)“ (1)天津医科大学免疫学教研室,天津300070;2】天津医科大学生物化学教研室,天津300070 4深圳康哲药业有限公司,深圳518029) 摘要 目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL.7402细胞为 在差异,确定了RPLl3A、uBC 2个看家基因用于校正目标基因的表达量.基因表达转录分析中内参基因选择的必要性在实 验中得以证明,更重要的是为各种实验因素影响下(尤其是新物质作用下)内参基因的选择介绍和提供了一种行之有效的方法. 关键词 内参基因,geNo彻程序,基因表达,实时定量PCR 33l 学科分类号R 基因表达分析在生命科学的众多研究领域中变 具有显著的抑制作用【叼.为了深入研究YSv的作用 得日趋重要,其研究的深入将为探索疾病相关基 机理,我们首先需要明确YSV对看家基因的影响 因、了解基因表达调控的复杂网络、解析生命奥 秘、最终为人类服务大有裨益.在转录水平进行基 因表达定量的方法,如实时定量PCR、RNA印迹、 核糖核酸酶保护分析、基因芯片等,在蛋白质水平 基因的转录水平进行检测, 同时采用 进行定量的方法如蛋白质印迹等,都需要应用内参 基因对目标基因表达量进行校正,以期获得真实可 进行统计学处理,分析哪些看家基因适于YSv对 靠的结果.看家基因有几百种,最常用的为ACTB、 肿瘤基因表达水平影响的研究. GAPDH、18SrI斟A、28SrI斟A,理想的看家基因 1材料和方法 应在各种实验因素条件下,各种类型的组织或细胞 中均恒定表达【“.然而,大量的研究结果表明,任 1.1 何一种看家基因的所谓恒定表达都只是在一定类型 的细胞或实验因素作用下“有范围”的恒定.在其 他类型的细胞中或实验因素作用下则是变化的,有 培养基调整成5×10。个/ml的单细胞悬液,每瓶 时可以是十几倍、几十倍甚至是上百倍的 4ml接种于25 差异瞳31.盲目地使用一种看家基因作为内参,一方 的细胞培养箱中培养24 h后,实验组分别加入含 面可能使基因表达的微小差异难以发现,另一方面 可能引致错误甚至相反的结论【45】.本研究中的酪丝 缬肽(tyroservatide,YSV)是一种新三肽化合物,化 学结构组成为L.酪氨酰一L一丝氨酰。L一缬氨酸,分 (03007)资助. 子结构式为C。7H:N,O。,分子质量为367.40,先前 研究表明YSV对人肝癌BEL.7402裸小鼠移植瘤 收稿日期:2006.09.08,接受日期:2006.11.18 万方数据 万方数据 万方数据 2007;34(5) 张艳君等:基因表达转录分析中内参
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