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shiyan抗微生物药物和敏感性试验
抗菌药物敏感试验 临床病原生物学教研室 抗菌药物敏感性试验 纸片琼脂扩散法 经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实验室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和Bauer所建立的纸片琼脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法纸片琼脂扩散法) 实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度. 目的要求 1.掌握纸片扩散法的原理、操作方法、结果判读和临床意义 2.熟悉纸片扩散法的质量控制。 器材与试剂 1.菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌 2.培养基：M-H培养基 3.试剂：无菌生理盐水、0.5麦氏比浊管、药敏纸片 4.其他：无菌棉拭、镊子、毫米尺、接种环 操作步骤 1.取分纯待测菌菌落(直径1mm)数个置于生理盐水管中，校正浓度为0.5麦氏标准，校正后菌液15min内接种。 2. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转挤去后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60度,最后沿平板内缘涂抹1周 3.平板置室温下3~5分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm 4.35℃孵育16~18h,甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育24h ，量取抑菌圈直径。 5.药敏纸片的选择参照书上表1-2 抗菌药物敏感性试验 (六) 影响因素 1.培养基质量,如PH,深度,硬度,表面湿度等.商品化或自制MH平板须标准质控菌株检测,合格后方能使用 2.药敏纸片的质量,含药量和保存方式 3.接种菌量正确与否,取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用和保存 4.试验操作的质量 5.孵育条件,温度和时间 6.抑菌圈测量工具的精度 7.质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异 抗菌药物敏感性试验 (七) 质量控制 采用标准菌株金葡菌ATCC25923,大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药敏试验 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内.如果超出范围,则不应发出报告,及时检查原因,予以纠正 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标,天数为横坐标绘制室内质控图,要求每天抑菌圈变化数不得超过2mm 标准菌株应每周在MH琼脂上传代一次,4℃保存
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