表没食子儿茶素没食子酸酯通过活性氧生成抑制细菌的生长研究.pdfVIP

第41卷 第 1期 河南师范大学学报 (自然科学版) !／o1．41 No．1 2Ol3年 1月 JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScienceEdition) Jan．2013 文章编号 ：1000—2367(2013)01—0115—04 表没食子儿茶素没食子酸酯通过活性氧生成抑制细菌的生长 申羽佳 ，崔海燕，张东芳，王坤英，李卫国 (河南师范大学 生命科学学院，河南 新乡 453007) 摘 要 ：表没食子儿茶素 3一没食子酸酯(EGCG)具有显著的抗氧化等生物学作用．运用平板菌落计数法，测定 了5、10、20mg／IEGCG抑制细菌生长繁殖 的效应 ，分析了200U／mI过氧化氧酶和 80rag／1N一乙酰半胱氨酸对 EGCG抑菌作用 的影响机制．结果显示 EGCG 以剂量依赖方式抑制表皮葡萄球菌 (S．epidermidis)和大肠杆菌 (E． coil)的生长繁殖 ，而过氧化氢酶和 N一乙酰半胱氨酸则减弱 EGCG 的抑菌作用 ，表 明EGCG抑制细菌生长 的作用可 能是通过生成活性氧介导 的． 关键词 ：表没食子儿茶素一3一没食子酸酯；抑菌作用；活性氧 ；过氧化氢酶 ；N乙酰半胱氨酸 中图分类号：Q936；Q939．93 文献标志码 ：A 表没食子儿茶素一3一没食子酸酯 (epigal1ocatechin一3一gallate，EGCG)是绿茶多酚 (greenteapolyphenols， GTP)的主要活性成分 ，具有抗氧化 、抗肿瘤 、抗炎和杀菌等多种生物学特性 [1。]．通常认为 EGCG具有抗氧 化特性，但也有研究表明EGCG在中性和弱碱性条件下 (pH7．0)或者有过渡金属离子 Fe计和 Cu 存在 时呈现促氧化特性 (11．对于 GTP及 EGCG杀菌机制 ，有学者认为与它们在培养基 中氧化生成 H O。有 关 ¨ J，也有学者认为与氧 自由基生成有关 【．为阐明EGCG抑菌作用与活性氧 (reactiveoxygenspecies， R()S)生成的关系，本实验 以革兰 氏阳性菌表皮葡萄球 菌 (S．epidermidis)和革兰氏阴性菌大肠杆菌 (E． coil)为材料 ，观察 了不同浓度 EGCG对两种细菌生长繁殖的抑制效应 ，及过氧化氢酶 (catalase)和 N一乙酰半 胱氨酸 (N—acetylcysteine，NAC)对 EGCG抑菌效应的影响． 1 材料与方法 1．1 菌 株 本实验所用菌株为表皮葡萄球菌 (s￡＆p^zo∞cc“epidermidis)和大肠杆菌 (Escherichiacoil)，均为本 院微生物实验室保藏菌种 ，于牛肉膏蛋 白胨培养基 (pH7．2)中37C培养． 1．2 试 剂 EGCG(纯度大于 98％)由成都普瑞法公司生产 ，过氧化氢酶和 NAC为 Sigma公司产品，蛋 白胨 、牛肉 膏、琼脂等均为国产分析纯． 1．3 实验方法 1．3．1 菌悬液制备 将活化后的表皮葡萄球菌和大肠杆菌转接到牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基上 ，37。C培养 24h．然后取少量菌体于无菌生理盐水内制成菌悬液 ，调整细菌浓度至 2×10。CFU／mL． 1．3．2 EGCG对细菌生长的抑制效应 分别取 900 L的表皮葡萄球菌和大肠杆菌菌悬液与100 L的 5O、 100、200mg／LEGCG溶液混合 ，同时设置空白对照．各组充分混匀后 ，于37℃培养8h．然后各取 100 L的 细菌培养液涂布于平板上，均设 3个重复．于 37C培养 12h后 ，观察菌落生长情况 ，确定抑菌效果最强 的 EGCG浓度用于后续实验． 收稿 日期 ：201208—29 基金项 目：河南省教育厅 自然科学基金 (2010A180011)；河南师范大学生物学一级学科建设基金 作者简介：申羽佳 (1983 )。女，山西长治人，河南师范大学硕士研究牛，研究方向：皮肤创伤修复 通讯作者 ：李卫 国(1963 )。男，河南安 阳人 ，河南师范大学教授 ，博士．E—mail：liwg0618@htu．CD- 116 河南师范大学学报 (自然科学版) 1．3．3 N一乙酰半胱氨酸与 EGC