表达hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立研究.pdfVIP

山东 农 业 科 学 2013，45(2)：1—4 ShandongAgriculturalSciences 表达 hTERT及 SV40T 永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立 上官陶 ，王洪梅 ，冯敏燕 ，仲跻峰 ，何洪彬h (1．山东省农业科学院奶牛研究中心，山东 济南 250131；2．山东省农业科学院家禽研究所，山东 济南 250023) 摘 要：构建pcDNA3．1一hTERT、pcDNA3．1一SV40T载体，线性化后 ，共转染荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞 ， 研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40T)对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞体外培养的 作用，并对细胞进行 RT—PCR检测分析及免疫荧光鉴定。结果表明，hTERT和SV40T在奶牛乳腺上皮细胞 中表达可以有效地延长细胞的体外培养时间，增加细胞传代次数 ，获得的细胞系可以正常表达角蛋 白。说明 在体外培养的乳腺细胞中共表达hTERT和SV40T可以有效延长细胞寿命且不影响乳腺细胞特性。 关键词：荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞；永生化 ；端粒酶；猿猴空泡病毒40大T抗原 中图分类号：Q786 文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2013)02-0001-04 EstablishmentofImmortalizedBovineM ammaryEpithelialCellLine ExpressinghTERT andSV40T ShangGuanTao，WangHongMei，FengMinYan ，ZhongJiFeng，HeHongBin (1．ResearchCenterofDairyCattle，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250131，China； 2．PoultryImtit~e，ShandongAcademyofAgriculturalSceinces，以Mn250023，China) Abstract Afterlinearization．theconstructedvectorsofpcDNA3．1一hTERTandpcDNA3．1一SV40T wereco—．transfectedintotheHolsteinbovinemammaryepithelialcellstoresearchtheroleofhumna telomer- asereversetranscriptase(hTERT)andsimianviurs40largeTtransfeetedantigen(SV40T)onthecultureof mammaryepithelialcellsinvitro．TheculturedcellsweredetectedbyRT—PCRnadidentifiedbyimmunoflu— orescencemethod．TheresultsshowedthattheCO—expressionofhTERTandSV40Tinbovinemammaryepi- thelial cellscouldeffectivelyprolonghtecellculturetime，increasethepassagenumber，andtheobtMned cellscouldnormaUyexpressingkeratin．Inaword，theexpressionofhTERTandSV40Tinculturedmammary cellscouldeffectivelyprolongcelllifeanddidnotinfluencethemammarycellcharacteristics． Keywords HolsteinCOWSmammaryepithelialcells；Immortalized；Telomerase；SV40Tantigen 乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的功能， 物质与乳腺疾病发生之间的关系，同时也可以用 在体外培养条件下仍可保持其特性，该特性在制 于乳腺发育调控的研究 J。但是，乳腺上皮细胞 备动物乳腺生物反应器及研究外源基因在细胞水