补体调节蛋白CD59 CD46在T细胞活化信号转导中的作用研讨.pdfVIP

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2018-01-10 发布于广东
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补体调节蛋白CD59 CD46在T细胞活化信号转导中的作用研讨.pdf

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摘要旨在探讨CD59与CD46在T细胞信号转导中的协同效应。鉴定。应用阳离子脂质体法转染Jurkat细胞，将细胞分为未转染的Jurkat细胞(I 胞增殖、WesternBlot测ZAP-70磷酸化的水平。结果：经PCR、限制性内切酶双酶切及测序鉴定，结果表明重组质粒序列插入正确。重组质粒pSUPER—siCD59和经G418筛选，得 pSUPER—siCD46分别转染的Jurkat细胞，可表达绿色荧光蛋白，用于T细胞，I组细胞的增殖能力，ZAP-70磷酸化条带的灰度值明显高于ⅡI、、Ⅳ组，差异有显著性(尸0．05)，，其中II组低于Ⅲ组(尸O．05)，差异有显著性，但 I、II组之间比较(尸O．05)，差异无统计学意义。结论：成功构建了重组质粒pSUPER—sicD46；分别建立了稳定转染重组质粒和CD46基因；通过MTT、WesternBlot实验证实，在CD59与CD46的共同作用下，号转导过程中存在协同作用。该研究创新之处在于，为跨膜蛋白CD46在GPI锚固蛋白CD59的T细胞跨膜信号转导中的作用提供了实验依据，为T细胞白血病的基因靶向治疗开辟了一条新的途径，具有重要的理论意义及广阔的临床应用前景。硕士研究生王美娟(免疫学) 指导教师高美华教授关键词：CD59；CD46；Jurkat细胞；T信号转导；协同效应 2 the effectsof in of CD59，CD46 transductionof Study synergistic singnal Tcell Abstract the effectof inositol Objectives：Tostudy synergistic glycosylphosphatidyl CD59onCD46-mediatedTcell (GPI)-anchoredprotein signal Two of CD59shRNA were pairssingle-strandedoligoencoding sequencesynthesized lined andinsertedinto vectorstoconstructrecombinant pSUPERexpression vectors．Then was with E．coliJMl09transfectedtworecombinantvectorsandone 4 Jurkatcellsweredividedinto negative-controlvector(siCD59一C)．Human groups： Jurkat cellstransfected晰tIl cells(I pSUPER group)、Jurkat plasmid(IIgroup)、Jurkat cellstransfectedwitl